褐藻胶的提取纯化、氧化降解及体外活性研究

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褐藻胶又称海藻酸钠或褐藻酸钠,是一种来源于褐藻细胞壁的水溶性酸性多糖,主要从海带、马尾藻、巨藻等褐藻中提取得到的。它是一类具有广泛生物活性的天然生物大分子,广泛应用于医药、食品、化工等领域。不同聚合度的褐藻胶表现出多样的功能特性。为了提高褐藻胶的利用率、扩大其应用领域,本论文以来源丰富的海带为原料,对褐藻胶的超声波辅助提取工艺、纯化工艺、聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸片段的分离、降解工艺、体外抗氧化活性及吸湿保湿性能等进行了研究,主要结果如下:1.褐藻胶提取工艺优化采用了单因素试验和无交互作用的正交试验优化了超声波辅助提取褐藻胶的工艺,得到了该方法的最优工艺条件,即超声低频,料液比1:60,提取温度80℃,溶液pH值为7,超声波作用时间40min,总提取时间60min,超声功率为350W。通过极差分析和方差分析,选取的四个因素对提取率影响的主次顺序依次为超声频率、料液比、提取液pH值、提取温度,其中超声频率对提取率具有显著影响。相同条件下,超声波辅助提取法的提取率较传统热水浸提法提高了67.25%。2.褐藻胶的纯化超声波辅助提取的褐藻胶经检测,不含有蛋白质,故无需进行脱蛋白,褐藻胶经大孔树脂脱色,透析袋透析,DEAE-23纤维素柱层析,Sephadex G-100柱层析得到一个多糖组分LJA。 LJA的含水量为12.62%,完全干燥后的LJA中的褐藻胶含量为99.28%,糖醛酸含量为98.65%。LJA经醋酸纤维素薄膜电泳及HPLC鉴定,表明其为均一性多糖。3.褐藻胶寡糖的制备根据聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸理化性质的不同,先采用盐酸降解法使褐藻胶长片段断裂成较短片段,然后通过pH分级的方法实现了二者的分离,最后采用阴离子交换色谱法对PG实现精制。经测定,PM片段、PG片段的平均分子量分别为6204、6138。以获得平均分子量为1500左右的寡糖混合物为目标,分别探究了过氧化氢降解制备的最优条件。褐藻胶LJA的最佳降解条件:5%褐藻胶溶液,pH5.0,3%过氧化氢,90℃水浴搅拌反应2h。PM、PG的最佳降解条件:5%褐藻胶溶液,pH5.0,2%过氧化氢,90℃水浴搅拌反应2h。TLC分析结果显示,寡糖混合物中包含聚合度为2-9的寡糖。通过红外光谱分析可知,过氧化氢氧化降解备的寡糖仍保持了原有的结构特点,只是部分寡糖产物的还原端1位碳醛基被氧化为羧基。4.褐藻胶及其寡糖体外抗氧化活性及吸湿保湿性研究褐藻胶及其降解产物在体外对羟自由基、超氧阴离子及脂质过氧化体这三种自由基都具有一定的抑制作用,在试验浓度范围内,它们的活性都具有浓度依赖性,且分子量越小显示出了越高的抑制活性。其中,OM对羟自由基的清除活性最高,OG不仅对超氧阴离子的清除活性最高,而且也具有良好的抗脂质氧化能力。褐藻胶及其降解产物在不同相对湿度(43%和81%)的环境中,表现出了稳定的吸湿能力,在干燥的硅胶环境下具有良好的保湿效果。其中,LJA在系列聚合度的褐藻胶中不仅具有最高的吸湿性能,而且还具有最好的保湿效果。
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