论文部分内容阅读
乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein，HBXIP)因与乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus x protein，HBx)特异性结合而命名，全长173个氨基酸，分子量约19 kDa。本实验室前期研究发现HBXIP在乳腺癌及转移癌组织中显著高表达，并具有促进乳腺癌细胞增殖和迁移的作用，但其详细分子机制尚不清楚。S100A4作为Ca2+结合蛋白家族的一员，在促乳腺癌发展和转移过程中发挥极其重要的作用。本研究从分子、细胞和组织不同水平探讨了HBXIP上调S100A4促进乳腺癌细胞增殖和迁移的分子机制，主要研究结果如下：
实验室前期研究结果显示，HBXIP在乳腺癌组织和转移淋巴结中阳性表达率分别高达75％(38/49)和94％(36/38)。本研究利用来源于同一组织包埋蜡块的切片对S100A4的表达进行了检测。结果显示，在HBXIP阳性的乳腺癌组织及转移淋巴结组织中S100A4的阳性率分别为81.6％(31/38)和88.9％(32/36)。表明HBXIP同S100A4的表达呈显著的相关性。我们进一步从乳腺癌细胞系中也获得类似的结果。应用Real-time PCR及Western Blot实验发现HBXIP可以上调乳腺癌细胞中S100A4 mRNA及蛋白水平。为进一步阐明HBXIP上调S100A4的分子机制。我们首先应用免疫组化实验(IHC)检测HBXIP的亚细胞定位，发现HBXIP主要定位细胞核，推测其具有转录功能。染色质免疫共沉淀(ChiP)结果显示HBXIP可与S100A4启动子结合，提示HBXIP可能参与S100A4的转录调控。应用荧光素酶报告基因方法分析显示，HBXIP对S100A4启动子的核心调节区位于+210～+334区域。应用凝胶阻滞分析(EMSA)进一步确定HBXIP与S100A4启动子+200～+239区域结合。生物信息学分析表明S100A4的+200～+239启动子区包含转录因子STAT4和GRβ的识别基序。EMSA结果显示STAT4识别基序的突变可阻止HBXIP同+200～+239区的结合；我们利用免疫共沉淀实验进一步证明了HBXIP可与STAT4蛋白结合，上述实验结果表明HBXIP通过STAT4结合S100A4启动子的+200～+239区。进而，我们检测STAT4是否介导了HBXIP对S100A4的转录调节。结果表明，S100A4启动子区STAT4的识别位点的突变或siRNA干扰STAT4的表达均可以抑制HBXIP对S100A4的上调作用，表明HBXIP通过STAT4调节S100A4表达。在功能上，我们应用MTT、EdU及划痕实验检测了HBXIP上调S100A4表达在乳腺癌增殖和迁移中的作用，结果显示HBXIP促进乳腺癌细胞系的增殖和转移是通过上调S100A4表达实现的。
综上所述，我们发现HBXIP促进乳腺癌细胞系的增殖和转移是通过与STAT4转录因子结合并共同激活S100A4的转录实现的。该研究进一步揭示了HBXIP促乳腺癌增殖和转移的分子机制，并为乳腺癌临床诊断和治疗奠定了理论基础并提供了新的靶点。