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猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种呼吸道传染疾病,传播速度快,死亡率高,严重危害养猪业的发展。本研究旨在建立一种稳定的PRRSV免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）和间接免疫荧光方法（IFA）的临床血清检测方法,利用建立的IFA方法检测临床PRRSV血清的抗体效价和中和抗体效价,研究抗体与中和抗体效价之间的关系,对抗体进行免疫评价分析,为疾病的预防和疫苗评价、免疫评价提供一定技术支持。本实验将过滤的PRRS病毒液接种到Marc145细胞,48h后用预冷的无水乙醇固定,加入PRRSV标准阳性血清,37℃孵育1h,然后加入1:700稀释的羊抗猪Ig G-HRP（IFA加入1:200稀释的Ig G-FITC荧光抗体）,37℃孵育1h,最后DAB显色5min,置显微镜下观察结果（IFA直接在荧光显微镜下观察即可）,即建立了PRRSV的IPMA和IFA临床血清抗体检测方法。IPMA和IFA中和抗体检测方法则是在上述方法的基础上将等体积的PRRSV和临床血清37℃孵育1h,然后接种到Marc145细胞上,其它步骤和上述方法一样。本研究成功建立了PRRSV的IPMA和IFA临床血清抗体和中和抗体检测方法,经过对IFA反应条件的优化,最终确定以100个TCID50的病毒接种Marc145细胞,培养48h后在﹣20℃用预冷无水乙醇固定30 min,制备成IFA细胞反应板,待检血清以1:50开始,可根据抗体强弱情况在此基础上进行连续倍比稀释检测抗体效价,羊抗猪Ig G-FITC工作浓度为1:200。IFA抗体检测方法与IDEXX试剂盒的检测结果比较,总符合率达到96.5%。且该方法只与PRRSV标准阳性血清发生抗原抗体特异性反应,和其它常见猪病毒标准阳性血清无交叉反应,血清稀释倍数在1:400时仍可检测出抗体,说明该方法的特异性和敏感性较高。利用建立的IFA检测方法分别检测两个猪场血清的抗体效价和中和抗体效价,发现抗体效价是中和抗体效价的6.25、12.5、25、50、100倍,确定抗体效价和中和抗体效价是正相关的关系,中和抗体和抗体的比值大概在1:10到1:100之间,其中25倍的最多,占48%,可根据抗体效价大概预测中和抗体效价,为PRRS的预防和疫苗评价、免疫评价提供一定技术支持。IPMA和IFA抗体检测方法具有特异性强、敏感性高、操作简单的特点,不仅能检测抗体,还能用于病毒等抗原的检测。