论文部分内容阅读
本研究采用RAPD和ISSR两种分子标记对41份枇杷属植物材料进行亲缘关系研究和遗传多样性分析,主要研究结果如下:1.枇杷属植物DNA提取方法的优化。针对枇杷属植物叶片富含多糖、多酚等物质的特点,采用改良的蛋白酶-K法,在裂解细胞核之前加入不含CTAB的提取介质I,经低速离心后可有效将多糖、多酚等物质与细胞核分离。蛋白酶K的加入能有效降解与DNA结合的蛋白质,避免蛋白质与DNA共沉淀。0.3mmol/L的NaAc可以使多糖和小分子rRNA不沉淀而只沉淀DNA。所提DNA纯度较高,能满足RAPD和ISSR扩增要求。2.优化了枇杷属植物RAPD反应体系,第一次系统优化并建立了枇杷属植物ISSR反应体系和扩增程序。优化后的枇杷属植物ISSR反应体系为:PCR扩增总体积为25μL,10×buffer2.5μL,Mg2+浓度2.0mmol/L,Taq酶1.5U,引物0.3μmol/L,模板60ng,dNTPs0.15mmol/L。反应程序为94℃预变性5mim;94℃变性1mim,退火70s,72℃延伸1.5mim,40次循环;72℃延伸7mim,4℃保存。3.在41份供试材料中,21条RAPD引物和20条ISSR引物分别产生456和436条带,多态性带分别为403和392条,多态性分别为88.4%和89.9%。4.根据RAPD和ISSR数据分析,各供试材料间的相似系数分别为0.5864—0.9387（RAPD）和0.6216—0.9106（ISSR）之间。聚类结果表明,RAPD和ISSR都首先将41份供试材料分为非栽培类群和栽培类群,但栽培类群分类存在一定差异,并且都与传统的枇杷分类有所不同。说明枇杷品种分类是由多因素共同决定的,其表现型也受多因素共同影响。5.通过RAPD和ISSR相似系数分析,大渡河枇杷总是处于栎叶枇杷和普通枇杷之间,偏向于栎叶枇杷,是连接枇杷属其他植物与普通枇杷之间的纽带。6.两种分子标记都未发现枇杷属植物春季开花型或秋冬开花型的特异谱带,并且聚类结果也不支持将枇杷属植物按花期分为春季开花和秋冬开花两大类,说明开花时期可能为多基因控制性状,将枇杷属植物依开花时期分类是不可靠的。