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己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)属于人工合成的雌激素,在人和动物体内会产生雌激素样效应。由于己烯雌酚对人体的致癌和致畸作用,世界各国均规定动物养殖中不得以任何途径和方式使用DES。本论文旨在研制快速检测己烯雌酚(DES)的酶联免疫(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒。首先用氯乙酸钠修饰DES分子中的一个酚羟基从而合成单羧甲醚己烯雌酚(diethylstilbestrol monocarboxymethoxyflurane , DES-MCME) ,然后以混合酸酐法将DES-MCME与载体蛋白(bovine serum albumin,BSA;ovalbumin,OVA)偶联形成完全抗原,并以紫外扫描分析完全抗原的偶联比率,再将得到的免疫原DES-BSA按免疫程序免疫新西兰白兔。结果发现己烯雌酚及其衍生物存在着顺反异构转化现象,极性有机溶剂的溶剂化作用促使顺反异构体的转化。高分辨质谱测得合成的DES-MCME分子量为325。人工免疫原及包被原的最适结合比为13和10。采用间接酶联免疫测定,产生的抗血清的稀释度可以达到102400。以此抗血清为基础,建立DES的间接酶联免疫方法。考察了反应时间、离子强度、洗液的浓度以及抗体稀释液的pH等影响因素。最终得到标准曲线的线性回归方程为y =-0.2978x + 1.4756, R2= 0.9986,其线性范围为0.1～25ng·ml-1,50%抑制率对应的浓度(IC50)为1.89 ng·ml-1,90%抑制率对应的浓度(最低检测限,LOD)为0.08 ng·mL-1。利用五种结构类似的甾体化合物检测其特异性,均无明显的交叉反应,特异性好。利用空白样品添加实验检测其精密度和准确度,DES以1ng·g-1和5 ng·g-1两个浓度分别添加到空白样品中测定回收率。结果表明:牛肉组织回收率为50～80%,变异系数为3.7～8.6%;猪肝的回收率为30～50%,变异系数为4.6～7.9%。将本试剂盒与荷兰EURO-DIAGNOSTICA公司的试剂盒进行比较,回收率、变异系数等结果基本一致,与LC/MS/MS方法比较,检测结果较接近。本论文研制的ELISA试剂盒的各项参数都达到了国外试剂盒的指标和要求,可用于实际检测。