海红果黄酮提取分离、结构分析及体外抗氧化活性的研究

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海红果是蔷薇科苹果属楸子(Malus prunifolia (wild) Borkh)的果实,主要生长在我国的山西河曲、偏关、保德,陕西府谷等县区,具有消食解腻,增进食欲,软化血管等作用,某些报道称该区用海红果代替山楂入药。近些年以来,市场上也出现了用海红果制成的各种保健品。目前对海红果食药成分的研究,尽管有一些关于营养成分的初步描述,但更深入的研究特别是对其黄酮类化合物的研究未见文献报道。本试验以山西省河曲县的海红果做为原料,在单因素的基础上,采用正交试验优化了海红果黄酮提取工艺;利用聚酰胺柱层析技术对海红果黄酮进行了分离纯化以及结构的鉴定,并对纯化的组分进行了抗氧化试验,为海红果的开发和利用提供了一定的理论依据。主要试验结果如下:(1)溶剂回流法提取海红果黄酮,正交试验设计从料液比、提取温度、提取时间以及乙醇浓度四个因素进行优化,从而得到提取海红果黄酮的最佳工艺条件。乙醇浓度对海红果中黄酮的影响最大,且影响程度远远高于其他三个单因素的影响程度。提取时间与提取温度的对海红果中黄酮提取影响程度很接近,而提取时间影响程度略高于提取温度。料液比对海红果黄酮的提取影响最小。溶剂回流法提取海红果黄酮的最佳工艺条件组合为乙醇浓度80%、浸提时间3h、料液比1:30、浸提温度40℃,验证试验提取率为5.27%。(2)通过薄层色色谱得到最佳展开剂为正丁醇:乙酸乙酯:水(4:1:5),并且初步判断海红果黄酮粗品中含有芦丁类似物质。用不同溶剂萃取海红果黄酮提取物得到乙酸乙酯萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物和水相残留物,对乙酸乙酯萃取部分用聚酰胺层析柱分离纯化并通过高效液相色谱得到三中纯品物质,纯度均达到90%以上,通过红外光谱分析以及核磁分析,推断物质B为芦丁,C为槲皮素,由于物质F量十分少,核磁分析未能分析出结果。(3)研究了海红果黄酮的不同极性萃取物对羟基自由基、超氧阴离子、DPPH自由基的清除能力,结果显示:乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、氯仿萃取物和水相剩余物对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基都有一定的清除作用,清除率大小顺序为:总还原能力:正丁醇萃取物<乙酸乙酯萃取物<氯仿萃取物<水相剩余物<Vc;对超氧阴离子的清除作用:氯仿萃取物<乙酸乙酯萃取物<正丁醇萃取物<水相剩余物<Vc;对羟基自由基的清除作用:氯仿萃取物<乙酸乙酯萃取物<正丁醇萃取物<水相剩余物<Vc;对DPPH自由基的清除作用:正丁醇萃取物<乙酸乙酯萃取物<氯仿萃取物<水相剩余物<Vc。说明海红果黄酮具有一定抗氧化作用。
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