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趋化因子在免疫细胞聚集到病灶局部的过程中起重要作用；共刺激分子可提供T细胞激活的共刺激信号。本研究观察了趋化因子和共刺激联合基因治疗小鼠肝癌的作用，期望通过趋化因子将免疫细胞聚集到肿瘤局部，同时通过肿瘤表达的共刺激分子激活肿瘤局部的免疫细胞，达到双重增强抗肿瘤效应的目的。 通过重组DNA技术，成功构建和鉴定了3种重组逆转录病毒载体，分别为重组mMIP-1α逆转录病毒载体、重组mB7-1逆转录病毒载体和重组m4-lBBL逆转录病毒载体(分别含不同的选择标记基因)。通过基因转染和克隆筛选等技术，得到了3株分泌不同重组逆转录病毒的包装细胞。通过病毒感染、单药物筛选等，得到了3株单基因修饰的小鼠肝癌细胞亚克隆；在此基础上通过病毒感染、双药物筛选等技术得到了1株mMIP-1α和m4-1BBL双基因修饰的小鼠肝癌细胞亚克隆。以RT-PCR和免疫组化分别检测到mMIP-1αmRNA和蛋白的表达，以流式细胞仪检测到mB7-1和m4—1BBL的表达。体外趋化实验证实mMIP-1α修饰的细胞能分泌有趋化活性的分子；肿瘤细胞／淋巴细胞混合培养证实mB7-1或m4-1BBL基因修饰小鼠肝癌细胞能刺激小鼠脾单个核细胞增殖。动物实验表明，mMIP-1α、mB7-1或m4-1BBL单基因修饰小鼠肝癌细胞的致瘤性降低；mMIP-1α和m4-1BBL基因共修饰小鼠肝癌细胞的致瘤性完全消失；mMIP-1α和m4-1BBL基因共修饰小鼠肝癌细胞使6倍于其细胞数的野生型肿瘤细胞不能在动物体内成瘤；以mMIP-1α和m4-1BBL基因共修饰小鼠肝癌细胞免疫小鼠，使动物获得了对野生型肝癌细胞的特异性预防作用；病理观察表明，mMIP-1α和m4-1BBL基因共修饰小鼠肝癌细胞接种的小鼠，其生长的瘤组织有大量炎性细胞浸润，并检测到CD4_+细胞和CD8_+细胞的浸润。本研究得到如下结论：1)趋化因子与共刺激分子基因共同修饰肿瘤细胞比趋化因子或共刺激分子基因单独修饰肿瘤细胞有更强地抗肿瘤作用；2)双基因修饰肿瘤细胞不仅使细胞自身不能在动物体内成瘤，而且能抑制野生型细胞的体内生长；3)双基因修饰肿瘤细胞免疫小鼠，使小鼠获得了特异性的预防肿瘤发生的作用。