【摘 要】
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目的:研究地黄饮子体内对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,以及体外对氧糖剥夺再复氧PC12细胞损伤的影响,并探讨其相关机制,为地黄饮子开发为抗脑缺血损伤的中成药新药提供实验依据。方法:健康SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、地黄饮子低、中、高剂量组（8、16、32 g·kg-1）和尼莫地平阳性对照组（1 mg·kg-1）,每组各10只。除假手术组外其余5组均建立双侧颈总动脉夹闭再灌
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目的:研究地黄饮子体内对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,以及体外对氧糖剥夺再复氧PC12细胞损伤的影响,并探讨其相关机制,为地黄饮子开发为抗脑缺血损伤的中成药新药提供实验依据。方法:健康SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、地黄饮子低、中、高剂量组（8、16、32 g·kg-1）和尼莫地平阳性对照组（1 mg·kg-1）,每组各10只。除假手术组外其余5组均建立双侧颈总动脉夹闭再灌注缺血损伤模型（Bilateralcommon common carotid artery occlusion/reperfusion,BCCAO/R）,缺血再灌注模型制备结束后,对大鼠进行神经行为学评分并于次日灌胃给药,1次/天,连续给药7天后,核磁共振血管成像（Magnetic resonance imaging,MRI）观察大鼠颅内血管变化;HE染色观察大鼠脑组织病理改变;ELISA检测大鼠大脑皮层组织、血清中促炎因子和抗炎因子的表达水平;流式细胞技术检测大鼠外周血中Tregs细胞和Th17细胞比例;Western blot检测大鼠脑组织中PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT、eNOS/p-eNOS相关通路蛋白以及血管内皮生长因子VEGF的表达。体外研究,采用PC12细胞制备氧糖剥离/再复氧细胞损伤模型（Oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）。MTT法检测不同浓度地黄饮子对PC12细胞增殖的影响;MTT法检测OGD/R细胞模型制备的最佳时间;普通光学显微镜观察地黄饮子对PC12细胞形态的影响;荧光倒置显微镜观察地黄饮子对PC12细胞增殖的影响。结果:地黄饮子可以增宽大鼠颅内血管直径（p＜0.05,p＜0.01）;改善大鼠脑组织神经元形态;降低大鼠大脑皮层以及血清中促炎因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-17（IL-17）含量（p＜0.05,p＜0.01）,增加大脑皮层以及血清中抗炎因子IL-10、转化生长因子（TGF）-β含量（p＜0.01）;提升外周血中Tregs细胞比例（p＜0.01）,降低Th17细胞比例（p＜0.05,p＜0.01）;上调 p-PI3K、p-AKT、p-eNOS 以及 VEGF 蛋白的表达（p＜0.05,p＜0.01）。体外研究发现,地黄饮子可以促进正常培养条件下PC12细胞的增殖;改善OGD/R损伤条件下PC12细胞的形态;促进OGD/R损伤条件下PC12细胞的增殖并上调p-PI3K和p-AKT蛋白的表达（p＜0.05,p＜0.01）。结论:研究结果表明地黄饮子给药处理后,脑缺血再灌注损伤大鼠血管新生通路调节蛋白PI3K、AKT、eNOS以及血管内皮生长因子VEGF等表达发生变化,地黄饮子发挥促血管新生的脑保护作用。并且血管新生的发生发展与脑缺血后大鼠体内促炎因子和抗炎因子失衡状态纠正,炎症反应得以抑制相关。另一方面离体实验研究结果表明地黄饮子改善了 PC12细胞氧糖剥夺再复氧的损伤并促进了PC12细胞的增殖,该作用与PI3K/AKT信号通路相关。综上研究结果为脑缺血的研究提供了新思路,也为临床应用地黄饮子治疗脑缺血疾病提供了理论基础。
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