论文部分内容阅读
研究背景慢性粒细胞白血病(Chronic Myelocytic Leukemia, CML)是一种获得性造血干细胞恶性疾病，是最常见的骨髓增殖性疾病。主要特点是t(9;22) q(34;11)基因异位从而导致BCR-ABL融合基因的产生，形成费城染色体为主要特点。BCR-ABL融合基因编码肿瘤蛋白P210BCR-ABL并具有抗凋亡活性。与CML的发病原因有关。甲磺酸伊马替尼（Imatinib mesylate，IM，Gleevec,格列卫)依赖性与非依赖性耐药机制可导致IM治疗失败。第二代第三代酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosinekinase Inhibitor,TKI)虽已经被FDA批准用于治疗CML，但价格昂贵，所以使用仍有局限性。越来越多的数据显示，新生血管参与了白血病的发生及进展。抗白血病患者骨髓血管新生成为白血病治疗的切入点之一。肿瘤进展直接与细胞的增殖与死亡不平衡有关。细胞凋亡机制的缺陷可导致CML恶性表型的产生。目前已知的抗凋亡蛋白家族中，BCL-2家族成员BCL-XL与BCL-2均为抗细胞凋亡蛋白，在癌症与肿瘤中，BCL-2、BCL-XL均存在过表达现象。目的1.研究重组人血管内皮抑素(Recombinant Human Endostatin, rhES)对慢性粒细胞白血病细胞株K562及慢性粒细胞白血病多药耐药细胞株K562/A02增殖抑制作用。2.研究K562、K562/A02细胞株经rhES作用后，观察相关凋亡蛋白BCL-2、BCL-XL及血管内皮生长因子VEGF表达的影响。研究方法1.以K562细胞及K562/A02细胞株为实验细胞，放置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养，直至其生长稳定。显微镜下观察K562及K562/A02细胞的细胞形态、生长状态；计数法绘制细胞生长曲线。2.CCK-8检测0、10、20、50、100、200和400μg/ml的rhES作用K562、K562/A02细胞6-72小时后的细胞活性并计算IC50。3.IC50浓度作为作用浓度作用于K562、K562/A02细胞株，使用流式细胞术检测经rhES作用后K562、K562/A02凋亡率。4.使用Elisa及实时荧光定量RT-PCR检测BCL-2、BCL-XL、VEGF的表达。结果1.CCK-8结果显示，rhES对K562、K562/A02细胞株有诱导细胞凋亡的作用。K562、K562/A02细胞株24小时后，细胞生长抑制50%的浓度(IC50)为100μg/ml，48小时后细胞生长抑制50%的浓度(IC50)为200μg/ml。2.rhES作用K562、K562/A02细胞后，经流式细胞术检测：100μg/ml与200μg/mlrhES作用于K562细胞24h，细胞凋亡率分别为13.60%和14.84%，作用于K562细胞48h后，细胞凋亡率分别为20.02%和23.64%。100μg/ml与200μg/ml rhES作用于K562/A02细胞24h，细胞凋亡率分别为10.97%和16.57%，作用于K562/A02细胞48h后，细胞凋亡率分别为13.33%和15.42%。3.Elisa与RT-PCR检测结果显示，100μg/ml、200μg/ml rhES分别作用K562、K562/A02细胞24h、48h后，BCL-2、BCL-XL、VEGF的表达均有下降，与未加药物组相比差异具有显著的统计学意义（P＜0.05）。结论1.rhES在体外不仅可以抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡，同样对白血病多药耐药细胞株K562/A02有增殖抑制及诱导凋亡的作用。2.rhES可降低K562、K562/A02细胞中BCL-2，BCL-XL，VEGF的表达（P＜0.05）。