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[目 的]原发性胆汁性胆管炎(Primary biliary cholangitis,PBC)是一种发病机制不清、与免疫及遗传背景密切相关的慢性自身免疫性肝病,主要以进行性的非化脓性小胆管炎症为病理特点。该疾病如果不及时干预,一般会在10到20年的时间内发展为肝硬化或肝功能衰竭。前期研究提示调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)在PBC中异常表达,但其调控机制及作用尚待进一步揭示;同时,研究发现异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)对Treg的遗传表观及功能有重要作用。本研究旨在探索IDH通过调控Treg的表达参与PBC发生发展,为疾病的发病机制、预测指标及未来诊疗提供新的思路。[方 法]1.收集2018年9月-2019年6月昆明医科大学第二附属医院的符合研究入选标准的PBC患者(n=18)和健康体检者(n=19)的外周血。提取外周血总RNA后,对其Treg的转录因子Foxp3、Th17转录因子RORyt、IDH1、IDH2使用实时荧光定量PCR检测其表达水平,使用IBM.spss statistics21.0统计PBC患者与健康体检者之间四个指标的表达差异。2.按照PBC患者肝组织的炎症病理分期,分为早期组(n=7)和晚期组(n=9),统计在PBC患者外周血早期、晚期之间Treg的转录因子Foxp3、IDH1、IDH2三个指标的表达差异。3.使用pearson相关性分析外周血中Foxp3与IDH1、IDH2表达的关联性。4.检测PBC患者外周血Foxp3甲基化水平。5.将昆明医科大学第二附属医院收集的22例PBC患者的肝组织根据炎症分期分为早期组(G1-G2期,n=10)以及晚期组(G3-G4,n=12),后进行石蜡包埋,使用免疫荧光和免疫组化检测两组肝组织中FOXP3、IDH1及IDH2的表达水平。统计PBC患者早期与晚期之间三个指标的表达差异。6.分析肝组织中Foxp3与IDH1、IDH2表达的关联性。[结 果]1.外周血Foxp3的表达量为:健康组vs PBC组(2.045×10-3±0.884×10-3 vs 1.449×1 0-3+0.908×10-3),P=0.058>0.05,两组表达差异无统计学意义。外周血RORyt 的表达量为:健康组 vs PBC 组(1.985×10-3±0.648×10-3 vs 2.523×10-3±1.537×10-3),P=0.187>0.05,两组表达差异无统计学意义。通过计算Foxp3/RORyt所得比值后,在健康体检组中的比值均值为0.9974±0.1537,在PBC组中Foxp3的比值均值为0.6100±0.1584,P<0.001,两组表达差异具有统计学意义。外周血IDH1的表达量为:健康组vs PBC组(1.002×10-2±0.416×10-2vs 0.442×10-2±0.333×10-2),P<0.001,由此可见IDH1在PBC组中低表达,两组表达差异具有统计学意义。外周血IDH2的表达量为:健康组vs PBC组(4.792×10-2±1.896×10-2 vs 2.854×10-2±0.752×10-2),P<0.001,由此可见 IDH2 在PBC组中低表达,两组表达差异具有统计学意义。2.外周血中Foxp3的表达量为:早期组 vs 晚期组(2.234×10-3±0.976×10-3 vs 0.921×10-3±0.347×10-3),P=0.002<0.05,由此可见,Foxp3在PBC晚期表达下降,两组表达差异具有统计学意义。外周血中IDH1的表达量为:早期组vs晚期组(7.308×10-3±2.961×10-3 vs2.186×10-3±1.147×10-3),P=0.003<0.05,由此可见,IDH1 在 PBC 晚期表达下降,两组表达差异具有统计学意义。外周血中IDH2的表达量为:早期组vs晚期组(3.454×10-2±0.485×10-2vs 2.387 ×10-2±0.569×10-2),P=0.001<0.05,由此可见,IDH2在PBC晚期表达下降,两组表达差异具有统计学意义。3.外周血中Foxp3与IDH1是呈显著正相关的,r2=0.8744,双侧显著性P<0.05。外周血Foxp3与IDH2是呈显著正相关的,r2=0.8434,双侧显著性P<0.05。4.PBC组外周血中Foxp3的甲基化水平均值为0.551±0.039,健康体检组中Foxp3基因的甲基化水平均值为0.395±0.075,P=0.001<0.05,由此可见,Foxp3基因DNA甲基化在PBC组中是上调的。外周血中Foxp3甲基化程度与Foxp3mRNA的表达是呈显著负相关的,r2=0.8269,双侧显著性P<0.05。外周血中Foxp3甲基化程度与IDH1是呈负相关的,r2=0.7127,双侧显著性P<0.05。外周血Foxp3甲基化程度与IDH2是呈显著负相关的,r2=0.8044,双侧显著性P<0.05。5.在PBC组肝组织中Foxp3量化后的表达量为:早期组vs晚期组(21.431±2.768 vs 18.045±3.670),P=0.026<0.05,由此可见Foxp3在PBC晚期表达降低,两组表达差异具有统计学意义。在PBC组肝组织中IDH1量化后的表达量为:早期组vs晚期组(7.352±1.639 vs 5.325±2.061),P=0.021<0.05,由此可见IDH1在PBC晚期表达降低,两组表达差异具有统计学意义。在PBC组肝组织中IDH2量化后的表达量为:早期组vs晚期组(5.303±1.386 vs 3.898±2.129),P=0.088>0.05,两组表达差异无统计学意义。6.肝组织Foxp3与IDH1是呈显著正相关的,r2=0.8326,双侧显著性P<0.05。肝组织Foxp3与IDH2是呈显著正相关的,r2=0.7928,双侧显著性P<0.05。[结 论]1.Treg/Th17在PBC中出现平衡紊乱,Treg作用下调,且在PBC外周血和肝组织中晚期Foxp3的表达较早期降低,Foxp3的表达与疾病进展有关。2.在PBC外周血中IDH1、IDH2同时下降,且在患者早晚期外周血和肝组织中IDH1、IDH2有显著差异。3.Foxp3与IDH1、IDH2且呈显著正相关性,IDH1、IDH2参与Foxp3的表达。4.PBC外周血Foxp3DNA启动子区甲基化水平升高,与Foxp3 mRNA、IDH1及IDH2水平成负相关,提示IDH1、IDH2通过调控Foxp3DNA启动子区甲基化水平影响Foxp3的表达。