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内生菌是指那些在其生活史中的某一定阶段或全部阶段生活在健康植物组织和器官内部,并与植物建立和谐联合关系的一类微生物。研究表明药用植物内生菌能产生与宿主植物具有相同或相似的抗菌、抗癌、抗氧化、抗糖尿病和免疫抑制的代谢产物,也可以产生新化合物,因此,内生菌成为一类重要资源。箭叶淫羊藿为一种重要的传统中药材,其内生菌研究还未见报道。本研究从药用植物箭叶淫羊藿根、茎和叶片中分离、筛选得到了具有抗菌活性的内生菌,为箭叶淫羊藿内生菌活性物质的研发奠定基础。 采用组织块和涂布分离法从箭叶淫羊藿根、茎、叶中分离纯化得到20株内生真菌和18株内生细菌。在20株内生真菌中,从叶内分离得到的内生真菌有11株,占全部真菌菌株的55％,从茎中分离的菌株为5株,占25%,其次是从根中分离的占20%,表明叶内含有的内生真菌较多。18株内生细菌中,14株从叶中分离得到,占77.8%,和内生真菌在箭叶淫羊藿中分布以叶中最多具有相似结果。 对18株菌基于16SrRNA基因序列系统发育分析结果显示,分离菌株与其相关的已知物种的典型菌株的16SrRNA基因序列相似性在96.79%～100%之间,说明大部分菌株与其系统发育关系最密切的相关菌株之间存在遗传差异,具有遗传多样性。18个分离细菌可以归为4个大的系统发育类群(Proteobacteria,Bacteroidetes,Firmicutes,Actinobacteria);8个科:Brevibacteriaceae(短杆菌科)、Streptomycetaceae(链霉菌科)、Flavobacteriaceae(黄杆菌科)、Pseudomonadaceae(假单胞菌科)、Enterobacteriaceae(肠杆菌科)、Rhizobiaceae(根瘤菌科)、Bacillaceae(芽孢杆菌科)、Staphylococcaceae(葡萄球菌科);10个属:Brevibacterium、Streptomyces、Flavobacterium、Myroides、Pseudomonas、Providencia、Pantoea、Rhizobium、Bacillus、Staphylococcus;14个物种。菌株JSM9022菌株与其系统发育关系最密切的已知物种的典型菌株(Flavobacterium glycines Gm-149T)的16SrRNA基因序列存在较大差异,相似程度为96.79%,低于97%;从JSM9022与其系统发育关系密切的菌株构建系统发育树可以看出JSM9022与Flavobacterium属菌株聚类在一起,并与Flavobacterium glycines聚在一个小枝上,故初步判断其为Flavobacterium属潜在新物种;菌株JSM9020与其系统发育关系最密切的已知物种的典型菌株的16SrRNA基因序列相似性虽然高于97%(98.61%),但是它在形态特征和部分生理生化特征上与相关的典型菌株存在一定的差异,可能代表Pantoea属的潜在新物种。20株内生真菌基于ITS序列的系统发育表明,这些内生真菌归属真核域的两个门(Ascomycota、Basidiomycota),9个科(Glomerellaceae、Hypocreaceae、Apiosporacea、Sclerotiniaceae、Trichocomaceae、Valsaceae、Pleosporaceae、Mucoraceae、Polyporaceae),12个属(Colletotrichum、Trichoderma、Fusarium、Arthrinium、Monilinia、Penicillium、Aspergillus、Phomopsis、Alternaria、Mucor、Polyporus、Irpex)。表现出较高类群多样性,在20株真菌中17株为子囊菌门(Ascomycota)真菌,占85%,3株属于担子菌门(Basidiomycota),占15%,说明子囊菌在箭叶淫羊藿中作为优势内生真菌存在。 采用琼脂扩散法对箭叶淫羊藿内生菌进行抗菌活性筛选,20株内生真菌进行抗菌活性筛选结果表明有8株菌对至少一种指示菌有抑制作用,占40%,其中JSM7003、JSM7004、JSM7007对8种指示菌有较好抑制作用,JSM7006对6种指示菌有抑制作用;在18株内生细菌中,11株菌对至少一种指示菌有抑制作用,抑制率为61.2%,其中内生细菌JSM9004对7种指示菌有抑制作用;这5株内生菌均有较广的抗菌谱,值得一步研究。