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反相高效液相色谱-二极管阵列检测法在食品维生素A和维生素E（α-生育酚）测定中的应用前言维生素A（Retinol）和维生素E（Tocopherol）是机体维持正常代谢和机能必需的脂溶性维生素。由于这两种维生素在外界环境中不稳定，易受光、氧等影响而被氧化破坏，影响因素较多，因此寻找合适的测定方法同时测定维生素A和E仍然是目前检验技术的难点。目前的国家标准测定方法测定时间长、方法繁琐，可能导致样品中脂溶性维生素损失，回收率也不高。本文建立了一种快速、灵敏、准确的反相高效液相色谱法同时测定食品中维生素A（retinol）和α-生育酚（α-tocopherol）的方法，样品处理简单，方法简便易行，并用建立的方法对鞍山地区市售婴幼儿食品及保健食品中维生素A和E进行了测定，取得较好的结果。材料与方法一、材料（一）主要仪器和试剂美国安捷仑1100高效液相色谱仪，二极管阵列检测器；色谱柱：Supelco C 18柱，15cm×2.1mm，5μm（美国安捷仑公司）；超声波清洗器；N-EVAP TM 112氮气吹扫仪；LXJⅡ型离心沉淀机，0～4000r／min；0.45μm有机系针筒式微孔滤膜过滤器；超纯水系统（中国北京）；维生素A和α-生育酚标准品，含量＞99.0％（美国sigma公司产）。（二）样品来源随机抽取鞍山地区市售婴幼儿食品及保健食品。二、方法取一定量食品样品加入无水乙醇、氢氧化钾及焦性没食子酸，80℃水浴皂化30min，经石油醚提取，氮气吹扫浓缩致干后用流动相溶解，进样5μl分析；色谱条件：色谱柱Supelco C 18柱（15cm×2.1mm，5μm），流动相甲醇：水（93：7），流速0.4ml／min，柱温40℃，DAD扫描波长范围210～370nm，检测波长325nm（Vitamin A）和294nm（Vitamin E）。实验结果一、维生素A与维生素E检测相关性研究维生素A在1.0～100.0mg／L浓度范围内线性良好，相关系数r=0.9998；维生素E在0.10～10.0mg／L浓度范围内线性良好，相关系数r=0.9991。二、维生素A与维生素E回收率实验本方法维生素A和维生素回收率＞96％，效果良好。三、维生素A与维生素E精密度检测取1份样品进行精密度试验，重复测定5次，精密度较好。四、反相高效液相色谱-二极管阵列检测法与国家标准测定方法比较称取同一样品（完达山乳粉）5份，分别用本法和国家标准测定方法GB／T5009.82-2003测定，检测结果无显著性差异。五、反相高效液相色谱-二极管阵列检测法对鞍山地区样品评估在鞍山市场抽取婴幼儿食品及保健食品30份，分别用国家标准方法和本方法进行测定，按照相应国家标准和产品标识判定，Va和Ve的合格率为100％。讨论一、色谱条件的选择分别应用甲醇、甲醇：水、甲醇：乙酸：水以及不同浓度范围NH4Ac水溶液与甲醇按不同比例混合等几种流动相，经实验证明，在甲醇：水（93：7）条件下，几种脂溶性维生素之间，以及和样品中干扰物能达到较好的基线分离；在0.2ml／min～2.0ml／min范围内改变流动相流速，在流速为0.2ml／min～0.8ml／min几种维生素出峰时间合适，峰形较好，干扰少；对几种维生素标准溶液用紫外光谱仪进行扫描，发现维生素A在325nm、维生素E在294nm处有最大吸收峰，二极管阵列检测器的紫外吸收光谱图也证实了这个结果，为保证二极管阵列检测器检测波长范围包含所需波长，我们确定波长扫描范围在210～370nm之间；我们确定进样量为5μl，测定结果令人满意。二、样品前处理条件的选择通过比较几种不同的皂化剂及不同浓度，最后我们选择1∶1KOH溶液20ml；温度越高皂化效果越好，综合考虑，我们采用80℃水浴，皂化30min以保证各种样品能皂化完全。通过比较BHA、对苯二酚和焦性没食子酸等几种抗氧化剂，发现在皂化液中加入16g／L的焦性没食子酸，可有效地保护脂溶性维生素不被破坏。三、标准曲线的线性范围与最低检测量将混合标准系列溶液进样5μl进行测定。用峰面积比对浓度绘制标准曲线，维生素A在1.0～100.0mg／L浓度范围内线性良好，相关系数r=0.9998；维生素E在0.10～10.0mg／L浓度范围内线性良好，相关系数r=0.9991。以基线噪声三倍峰面积对应的维生素A和维生素E含量作为最低检测限，测得维生素A最低检测量为0.8ng；维生素E的最低检测量为90.7ng。四、回收率试验与精密度试验取同一样品4份，测定维生素A和维生素E回收率，在96％以上。取1份样品进行精密度试验，重复测定5次，精密度较好。五、反相高效液相色谱-二极管阵列检测法与国家标准测定方法比较对照实验显示，反相高效液相色谱-二极管阵列检测法与国家标准测定方法GB／T5009.82-2003检测结果无显著性差异，本方法测定时间为2.5小时，检验成本119元，国家标准测定方法测定时间为4小时，检验成本176元。由此可见，本方法省时，节约检验成本。六、反相高效液相色谱-二极管阵列检测法对鞍山地区样品评估结果在鞍山市场随机抽取婴幼儿食品及保健食品30份，分别用国家标准方法和本方法进行测定，按照相应国家标准和产品标识判定，Va和Ve的合格率为100％。结论反相高效液相色谱-二极管阵列检测法样品处理简单，方法简便易行快速，准确性、稳定性高，回收率高，与国家方法比较，节约检验成本，因此适于推广和实施。