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根据四种木霉PDA培养基培养特性,分析比较木霉生长情况、产孢情况、产孢条件。从哈茨木霉菌种固体培养基培养特性、哈茨木霉菌种液体培养基培养特性、哈茨木霉菌液态发酵产孢条件的优化,找到哈茨木霉孢子最快、最大生产量的生产方法。木霉对杨树烂皮病和水稻稻瘟病生防效果。结果如下: (1)四种木霉培养特性。用PDA培养基在25℃培养箱中培养四种木霉。经过15天,发现1号柠檬绿色木霉(Trichoderma citrinoviride)干燥、2号哈茨木霉(Trichodermaharzianum)首先干燥枯竭、3号拟康宁木霉(Trichoderma pseudokoningii)发干、4号加纳木霉(Trichoderma ghanense)较湿。此种条件下,哈茨木霉生长最为迅速,但产孢量极少,很快衰竭。加纳木霉则生长最慢,产孢量最大。 (2)哈茨木霉培养特性。用PDA培养基在不同温度下,不同供氧条件培养哈茨木霉。哈茨木霉在温度较高的环境下生长较快,温度较低则生长缓慢;在有氧的条件下生长较快,缺氧的条件下生长较慢;在有氧的条件下有利于产生分生孢子,缺氧的条件下有利于菌丝的生长;在水分充足的条件下生长较快,温度高干燥条件下很快衰竭。 (3)木霉菌对病原菌的拮抗机理。研究包括菌落的对峙培养试验、发酵液的抑菌试验、挥发性物质的抑菌试验和分生孢子提取物的抑菌试验。 与稻瘟病菌的对峙培养过程中,5种木霉菌生长都比病菌生长快,显示了很强的对营养和空间的竞争力;木霉菌发酵液抑菌试验中,3号的抑菌率高于其它4种木霉菌,为29.00%,2号、4号、5号相差不多,都在23~4%左右,1号的抑菌率是最低的,为6.75%;木霉菌挥发物质抑菌试验中,3号和2号的抑菌率始终高于其它3种木霉菌,最高时分别为64.77%和62.69%,1号和4号相差不多,都在50%左右,5号的抑菌率是最低的,为32.64%;分生孢子提取物的抑菌试验结果显示:对杨树烂皮病的抑菌效果最好的方法为功率为6,15min的方法,抑菌率为53.1%;甲醇的100倍液的方法抑菌率为44.05%。对水稻稻瘟病的抑菌效果最好的是NaOH方法,100倍液效果最好。 (4)哈茨木霉产孢条件优化。哈茨木霉菌液态发酵的条件进行了温度、初始pH值、供氧条件和初始接菌量笔4个方面的筛选。结果表明,产生分生孢子的最佳发酵条件组合为:温度25℃、初始pH=6、供氧条件为250mL的三角瓶装瓶量20mL、初始接菌量0.1mL;产生厚垣孢子和菌丝的最佳发酵条件组合为:温度20℃、初始pH=8、供氧条件为250mL的三角瓶装瓶量160mL、初始接菌量0.05mL。厚垣孢子多数发现在基内生菌丝内,气生菌丝和生长新区菌丝上则少或无。 哈茨木霉产孢与光照、水份有着密不可分的关系,液体发酵液在无光的情况下只长菌丝,在有光的情况下产生孢子;提取孢子后用蒸馏水洗过的菌片菌丝放在500ml的烧杯中三天后观察表面覆盖一层绿色的孢子。说明哈茨木霉菌丝在缺乏养分,有光和充足的氧气就可以产孢。