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目的:乳腺癌是威胁女性健康最主要的恶性肿瘤之一。近20年来中国女性乳腺癌的发病率和死亡率增长迅速,发病人数占全球的11.19%,仅次于美国,防控形势十分严峻。乳腺癌的发生发展是环境与遗传交互作用的结果,其病因学较为复杂。近年来,内分泌干扰物(endocrine disrupting chemicals,EDCs)因其影响机体内环境稳态,并能够产生一定的损伤效应而备受关注。在乳腺组织分化程度较低,乳房发育的关键时期,内分泌干扰物的低剂量暴露增加了乳腺癌的易感性。目前,双酚类(BPs)和邻苯二甲酸酯类(PAEs)化合物是两类备受关注的EDCs,它们作为塑料制品的主要原材料和增塑剂,被广泛应用于日常生产生活中,在环境和人体内均可以检测到,已成为危害比较严重的化学污染物。考虑到实际生活中的环境污染物多混合存在,加之人体暴露途径的多样化,而且这种混合接触模式可能与各物质单独作用时呈现不同的毒性效应,因此对单一污染物毒效应的研究已不能满足实际需要。邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)与双酚A(BPA)在环境中普遍存在,交互作用比较复杂,由于人群研究的局限性,导致调查结果差异较大,且实验证据尚不充分。乳腺作为DEHP和BPA的靶器官之一,二者单独和联合暴露是否会影响乳腺癌的发生发展及其作用机制至今仍不清楚。因此,探讨内分泌干扰物单独或联合暴露所致乳腺肿瘤发生的相关机制是本研究拟解决的关键问题。研究方法:1.乳腺肿瘤模型的建立:选取4周龄健康雌性SD大鼠160只,随机分8组(n=20)。按是否给予致癌剂分为两部分;其中给予致癌物预处理组采用二乙基亚硝胺(DEN)等3种致癌物构建乳腺肿瘤致癌模型,同时给予DEHP 150mg/kg和BPA 20mg/kg单独及联合灌胃染毒至30周后处死。2.HE染色观察大鼠乳腺组织病理改变;免疫组化检测乳腺组织PCNA表达。3.RT-qPCR方法检测ERα、CREB、HDAC6和c-Myc等基因的mRNA表达水平。4.Western blot方法检测ERα、CREB、HDAC6、c-Myc的蛋白表达水平。结果:1.HE染色检测大鼠乳腺病理改变情况,结果显示长期DEHP和BPA暴露导致大鼠乳腺正常结构基本消失,乳腺导管上皮细胞增生,小叶数量增加,提示内分泌干扰物长期暴露可能诱导大鼠乳腺增生,且DEHP和BPA联合暴露组大鼠乳腺增生更加严重。2.给予致癌物DMD预处理后,DEHP和BPA联合暴露显著降低了大鼠乳腺肿瘤发生的潜伏期,提高了乳腺肿瘤发生率。病理结果显示DEHP和BPA单独暴露组大鼠乳腺肿瘤组织呈乳头状排列,二者联合暴露组大鼠乳腺肿瘤分化程度低,乳头状排列融合成筛孔状。提示在大鼠肿瘤模型中,DEHP与BPA联合暴露对乳腺肿瘤的易感性有协同作用。通过免疫组化检测肿瘤标记物PCNA的表达,对照组PCNA基本属于阴性表达,且DEHP和BPA联合暴露组大鼠乳腺组织PCNA阳性率升高。在给予致癌物预处理后,PCNA的阳性率显著升高,且在DEHP+BPA暴露组,PCNA的阳性率远高于DEHP和BPA单独暴露组。3.通过Realtime-qPCR和Western blot检测各处理组大鼠乳腺组织ERα及下游转录因子CREB的表达,结果显示未给予DMD处理组中,DEHP和BPA联合暴露导致大鼠乳腺组织ERα的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05)。DMD预处理后,DEHP和BPA单独及联合暴露导致大鼠乳腺组织ERα的mRNA和蛋白表达也显著升高(P<0.05),且与DMD单独处理组相比,DEHP和BPA联合暴露会显著增加ERα的mRNA表达水平(P<0.05)。同时BPA单独暴露及DEHP和BPA联合暴露组大鼠乳腺组织CREB蛋白的磷酸化水平显著高于对照组(P<0.05),给予DMD预处理后,DEHP和BPA单独及联合暴露均会诱导大鼠乳腺组织CREB蛋白的磷酸化水平显著升高(P<0.05)。4.通过Realtime-qPCR和Western blot检测各处理组大鼠乳腺组织HDAC6和c-Myc表达情况,结果显示在未给予DMD处理组中,DEHP和BPA联合暴露组大鼠乳腺组织HDAC6的mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),而HDAC6的蛋白表达水平未观察到明显改变。给予致癌物预处理后,DEHP和BPA单独及联合暴露组大鼠乳腺组织的HDAC6的mRNA和蛋白表达水平均显著高与对照组(P<0.05),同时DEHP和BPA联合暴露会导致大鼠乳腺组织c-Myc的m RNA和蛋白表达升高(P<0.05)。DMD预处理后,DEHP和BPA单独及联合暴露均会诱导大鼠乳腺组织c-Myc的m RNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。且与DMD单独处理组相比,DEHP和BPA联合暴露会显著增加HDAC6和c-Myc的mRNA表达水平(P<0.05)。结论:1.邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)与双酚A(BPA)长期联合暴露可干扰大鼠乳腺发育,诱导乳腺增生。DEHP与BPA联合暴露可协同促进乳腺肿瘤的发生,缩短乳腺肿瘤的潜伏期。2.邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)与双酚A(BPA)长期联合暴露可经雌激素受体激活下游信号转导通路,增加HDAC6表达,进而上调原癌基因c-Myc,增加致癌物所致乳腺肿瘤的易感性。