论文部分内容阅读
本试验对杨树根癌病菌进行了分离、鉴定；并且采用室内平板法对杨树根癌病表现拮抗作用的细菌、真菌、放线菌进行了筛选，并对筛选到的菌株最优发酵条件及其活性物质的理化活性进行了测定，为杨树根癌病拮抗菌的研究奠定了基础；最后对一些杀菌剂、抗菌素对杨树根癌病菌及筛选的拮抗菌的抑菌活性进行了室内平板测定，以期对杨树根癌病的化学防治及研制生物源农药的必要性提供指导。从杨树根瘤中筛选出11株具有土壤杆菌菌落特征分离物，通过染色镜检观察均符合致瘤农杆菌特征。通过胡萝卜切片及毛白杨接种试验，只有3株分离物致瘤，可以基本断定为杨树根癌病原菌。从两种土样共分离得细菌23株、真菌11株、放线菌63株，并且采用纸片抑菌圈法分别测定了它们对杨树根癌菌菌株A-2生长的抑制作用。分离出表现拮抗抑活性的细菌菌株8株，占所测定细菌菌株数的26.7％，其中，2株菌株抑菌活性较强（抑菌圈直径为1.5-3.0 cm），6株菌株抑菌活性较低（抑菌圈直径小于1.5 cm）。而11株真菌对病原菌菌株A-2均不表现拮抗作用。采用双层平板法重点对两种杨树根围土样分离出的63株放线菌进行抑菌活性测定，共筛选出表现拮抗活性的拮抗菌菌株17株，占所测菌株数的26.9％，其中5株表现出较强的抑菌活性（抑菌圈直径大于3.0 cm），占总拮抗菌株数的29.5％。同时对本试验室保存的5株拮抗菌菌种的抑菌活性进行了测定，有3株表现较强拮抗活性（抑菌圈直径为1.5-3.0 cm）。选取菌株T-S-22为筛选得的最优拮抗菌株，其抑菌圈直径为3.80 cm。确定了菌株T-S-22表现最佳拮抗活性的发酵培养条件：黄豆浸汁发酵培养基（培养基B），28℃，pH值7.0，每250ml三角瓶装量50ml，摇床转速180 r／min，振荡培养72 h。菌株T-S-22的发酵粗提液对热、酸碱具有一定的稳定性，在高温及强酸碱条件下仍能保持高的抑菌活性。对活性物质的提取试验结果表明，该类次生物质存在于发酵液与菌体之中，既有脂溶性成分，也有水溶性成分。通过乙酸乙酯抽提、旋转蒸发制备的活性物质粗提液经薄层层析（TLC）分析后，共分离出四个组份，组分Ⅰ和组分Ⅱ表现抑菌活性，推测该活性物质为多组分混合物。评价3种杀菌剂和4种抗菌素对杨树根癌病原菌的抑菌能力，并确定杀菌剂对拮抗菌的作用效果。结果表明：福美双对根癌病原菌A-2及拮抗菌株T-S-22均有抑制作用；多菌灵仅在4×103μg／ml对根癌农杆菌A-2有极微弱的抑制作用；同浓度条件下CuSO4对杨树根癌病原菌菌株A-2及拮抗菌株T-S-22的抑制作用均最显著，但是继续培养，抑菌圈变小，甚至消失，说明CuSO4药剂的残效期非常短。4种抗菌素抑菌圈直径与抗生素浓度基本呈正相关，其中，硫酸链霉素对菌株A-22的抑制作用最高，土霉素次之，然后为四环素，农用链霉素最低，用量在0μg／ml-5×103μg／ml范围内对菌株A-22没有抑制作用。