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第一部分遗传性高钙尿大鼠维生素D受体基因SNP与特发性高钙尿症的相关性研究目的建立具有人类特发性高钙尿相似特点并且能够稳定遗传的高钙尿大鼠模型，探讨GHS大鼠维生素D受体基因单核苷酸多态性（SNP）与特发性高钙尿症之间有无相关性。方法将80只SD大鼠分别单独置于鼠代谢笼，收集连续两次24小时尿并测定尿钙，有最大尿钙值的3只雄鼠和雌鼠被选择繁殖后代，以后同此法选择3～4只雄鼠和4～6只雌鼠继续繁殖。然后提取42例GHS大鼠及24例正常对照大鼠全血标本中基因组DNA，应用聚合酶链反应结合DNA测序方法检测并分析了VDR基因5’-调控区的多态性位点单核苷酸多态性分布。结果在实验组中，80％（12／15）的雄鼠和56％（9／16）的雌鼠24h尿钙排泄明显高于对照组（2.98+1.16）和（2.54+1.04）mg／d，无论性别实验组大鼠的尿钙排泄明显高于对照组（P＜0.05），检测血中钙，磷两组均无明显区别，1，25（OH）2D3水平不高（P＞0.05）。GHS大鼠VDR基因5’-调控区共发现6个多态位点，将这些多态位点基因型变化与正常组比较，其中两个位点存在明显统计学差异。结论本研究成功地建立的大鼠实验性遗传性高钙尿症模型。遗传高钙尿鼠模型具有和人类该疾病相似的遗传背景，是研究IH在尿结石形成中的作用机制的一种很好的模型。研究还提示GHS大鼠VDR基因5’-调控区的单核苷酸多态性在GHS大鼠特发性高钙尿的发生中可能起到重要作用。第二部分论文一大鼠VDR组织特异性启动子荧光素酶报告基因载体的构建目的为进行VDR基因启动子的活性分析，构建含大鼠VDR基因启动子的荧光素酶报告基因重组表达质粒。方法以大鼠VDR基因组DNA为模板，通过PCR方法扩增转录起始位点上游DNA序列。PCR产物定向克隆到含荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中，并经限制性内切酶消化鉴定。结果通过酶切鉴定和基因测序，证明成功地构建了含大鼠VDR基因启动子的荧光素酶报告基因的载体pGL3-GHS-Luc和pGL3-N-Luc。两种质粒仅仅存在两处单核苷酸的差异。结论成功构建了含大鼠VDR启动子片段的报告基因载体，为分析VDR基因启动子的活性以及VDR基因的转录调控机制奠定了基础。论文二大鼠VDR基因多态性对荧光素酶报告基因表达水平的影响目的研究VDR基因5’端启动子序列对荧光素酶在Hela细胞中表达的影响，评价VDR基因启动子对下游基因的转录调节。方法将构建的不同大鼠VDR启动子荧光素酶表达载体pGL3-GHS-luc、pGL3-N-luc及空载pGL3-Basic经lipofectin转染Hela细胞，G418抗性筛选得到含各不同质粒的稳定阳性细胞克隆，检测报告基因荧光素酶表达。结果所构建的报告基因均能在Hela细胞中表达，pGL3-GHS载体转染的Hela细胞荧光素酶表达水平高于pGL3-N载体。结论VDR基因5’-调控区SNP在转录调控水平存在差异，这些差异可能对特发性高钙尿症的发生机制存在一定的影响。第三部分大鼠VDR基因5’端非编码区启动子报告基因载体的构建和分析目的克隆大鼠VDR基因基因启动子，构建含VDR基因启动子不同片段的报告基因载体，在Hela细胞中分析各种载体中VDR启动子活性。方法PCR、报告基因载体构建、瞬时转染和报告基因检测。结果通过PCR方法获得VDR启动子的3个不同片段，将它们克隆到萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中，构建出3种含VDR启动子不同片段的报告基因载体，将这些报告基因载体瞬时转染至Hela细胞，载体中的启动子具有不同的活性。结论成功构建了含大鼠VDR启动子片段的报告基因载体，为以后研究VDR基因表达调控的分子机制提供了实验工具。