B7-1/CD28途径对小鼠脑出血后脑损伤的影响及相关机制研究

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目的:脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)是指非外伤性脑实质内的出血,并伴随有其血肿区与周围组织的免疫炎症反应。CD80(即B7-1)主要表达于抗原提呈细胞表面,是T细胞活化的重要的免疫共刺激因子,对机体的免疫起着重要的调节作用。本课题中,我们将探索CD80分子/CD80单克隆抗体在脑出血模型中的免疫调节作用,并探索其对脑出血的发展及其预后的影响。方法:在小鼠脑立体定位仪下采用细菌性胶原酶IV注入雄性ICR小鼠左侧纹状体的方法建立小鼠ICH模型。在ICH术后10 min和24 h分别通过眼眶内眦注射的方法注入CD80单克隆抗体作为实验组,相应地注入无菌生理盐水为对照组。并在术后72 h处死小鼠,其中行为学处理的小鼠处死时间为21 d后。首先利用脾细胞增殖实验(spleen lymphocyte proliferation assay)评估CD80单克隆抗体对ICH后小鼠免疫功能的影响;为了确认CD80单克隆抗体对ICH后小鼠免疫功能的影响,还使用脏器指数(spleen index,SI and thymus index,TI)进行了验证;应用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)的方法检测IL-4和IFN-γ,来进一步验证CD80单克隆抗体是否对ICH后的T辅助细胞及其细胞因子起作用;为了评估CD80单克隆抗体对ICH后对小鼠脑水肿的影响,我们进行了脑含水量(brain water content)测定;为了验证自噬与凋亡是否参与了CD80单克隆抗体对ICH后预后的调节,我们利用免疫印记法(western blot)分别检测了凋亡活性相关蛋白(Bcl-2,cleaved caspase-3)和自噬活性相关蛋白(Beclin-1,LC3-II,p62)的表达水平;最后,为了评估CD80单克隆抗体是否通过以上途径改善了ICH后小鼠的预后,我们对小鼠进行了运动功能(motor function)和学习记忆功能(spatial memory acquisition)的检测。结果:CD80单克隆抗体降低了T淋巴细胞的增值率,显著降低了胸腺指数与脾指数;CD80单克隆抗体虽然没有明显引起机体IL-4和IFN-γ含量的变化,但是显著下调了ICH后IFN-γ/IL-4的比例;CD80单克隆抗体没有明显降低ICH后小鼠的脑含水量;从免疫印迹结果看,CD80单克隆抗体对ICH后小鼠的自噬与凋亡没有影响;从行为学结果看,CD80单克隆抗体并没有明显改变ICH后小鼠的行动功能评分,然而降低了ICH后小鼠18 d与20 d的学习记忆功能的潜伏期。结论:CD80单克隆抗体能够降低ICH后小鼠的免疫功能、能够反转ICH后IFN-γ/IL-4的比例;CD80没有明显降低ICH 3 d后小鼠的脑水肿;ICH引起了自噬激活增强、凋亡增强,CD80单克隆抗体并没有影响这两个过程;CD80单克隆抗体改善了ICH后小鼠的学习记忆功能。
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