糖类物质是生命体内重要的信息分子,广泛参与到免疫、癌变、衰老等许多生命活动中,因此对于糖的检测分析具有重要的意义。目前糖类物质的分析手段主要是利用色谱、质谱等仪器进行分析,但由于糖本身结构复杂、亲水性强、极性大等固有特征,在进行分析前通常对其进行衍生化处理以改善其分离效果、增强光学或质谱检测信号。本文采用一种新型氨氧基荧光衍生化试剂4-氨氧基甲基-7-羟基-香豆素(AOHC)结合还原氨氧化衍生方法,成功地对糖进行了荧光标记与色谱质谱分析,实现了高选择性与高灵敏度检测。主要研究结果如下:1、我们利用AOHC对寡糖进行肟化标记,并将之用于N-聚糖分析。通过依次使用单因子优化方法和响应曲面法,以衍生产物色谱峰峰面积为观察值,详细考察并优化了AOHC肟化衍生条件。与传统的2-AB衍生化法相比,本方法具有快速、灵敏、操作简便等优势。采用该方法,我们成功分析了糖蛋白RNase B中所有的N-聚糖。2、在前期研究的基础上,优化了衍生反应条件,即通过将样品溶液离心浓缩的方式来加快衍生反应的进行。随着溶剂的不断挥发,反应物浓度不断增大,进而促进了衍生反应的进行。该方法操作简便,无需添加缓冲液、催化剂,反应条件温和,在35℃条件下反应30 min即可。随后利用氰基硼氢化钠对肟化产物进行还原,实现了对寡糖的HPLC分离分析。将该方法应用到咖啡中寡糖的检测分析,成功测定了各寡糖的含量,样品回收率在88.1~105.3%之间,日内RSD小于2.87%、日间RSD小于7.70%。AOHC衍生化方法在寡糖的定量定性分析中有着很好的应用前景。3、探究了7种有机催化剂在AOHC衍生DP7的反应中的应用,各催化剂的催化效果依次为:对苯二胺、2-胺基-5-甲氧基苯甲酸、2-胺基-5-甲基苯甲酸、3,5-二胺基苯甲酸、苯胺、四氢吡咯、三乙胺。其中,2-胺基-5-甲氧基苯甲酸、对苯二胺催化效果最好,并且在中性条件下,仍具有很好的催化效果。我们将这两种催化剂用于婴儿奶粉中寡糖的检测,成功测得其中9种寡糖。实验结果表明,对苯二胺和2-氨基-5-甲氧基苯甲酸在催化肟化反应中有着很好的应用前景。