丙酮醛通过下调C-Myc影响结直肠癌细胞的相关生物学功能以及肿瘤的生长

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目的:  丙酮醛是一种小分子二羰基化合物,是人体内正常的代谢产物,丙酮醛的合成有多条途径,最主要的来源是糖酵解,丙酮醛在糖酵解过程中产生,最后经过乙二醛酶系统催化分解成为D-乳酸。丙酮醛具有极高的活性和细胞毒性作用,它能够与蛋白质、核酸等结合改变其结构和生理生化性状,引起生物大分子合成减少、酶活性降低、氧化应激增加、凋亡信号通路激活等细胞内的变化,进而导致细胞的增殖能力降低、凋亡增多等相关生物学功能的改变。研究表明丙酮醛具有抗肿瘤效应,且这一作用已在多种类型的肿瘤中得以证实,但丙酮醛在结直肠癌中的作用尚不清楚。本文拟从体外细胞和体内动物水平探究丙酮醛对结直肠癌的影响及其作用机制。  方法:  (1)利用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测丙酮醛对结直肠癌细胞DLD-1和SW480活性和增殖能力的影响;  (2)利用Annexin V-APC、PI荧光双染法检测丙酮醛对结直肠癌细胞DLD-1和SW480凋亡的影响;  (3)利用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测丙酮醛对结直肠癌细胞DLD-1和SW480迁移和侵袭能力的影响;  (4)利用葡萄糖测试盒、乳酸测定试剂盒和ATP检测试剂盒检测丙酮醛对结直肠癌细胞DLD-1和SW480葡萄糖消耗量、乳酸和ATP生成量的影响;  (5)利用Western blot技术检测丙酮醛作用后,结直肠癌细胞DLD-1和SW480中c-Myc蛋白表达量的变化;  (6)构建裸鼠人结直肠癌细胞DLD-1皮下移植瘤模型,检测丙酮醛治疗后异位皮下移植瘤的生长情况;  (7)利用乳酸测定试剂盒检测丙酮醛治疗后裸鼠血清中乳酸含量的变化;  (8)利用Western blot技术和免疫组化实验检测丙酮醛治疗后裸鼠皮下移植肿瘤组织内c-Myc蛋白表达量的变化。  结果:  (1)丙酮醛能够抑制结直肠癌细胞DLD-1和SW480的活性、增殖能力、迁移和侵袭能力,并诱导其凋亡,丙酮醛的作用程度与作用浓度呈正相关,加入丙酮醛的清除剂氨基胍后丙酮醛的作用可被逆转;  (2)丙酮醛作用后两种细胞的葡萄糖消耗量、乳酸生成量和ATP生成量均减少,同时c-Myc蛋白的表达量发生下调;  (3)丙酮醛治疗后,结直肠癌细胞DLD-1裸鼠皮下移植瘤的生长受到抑制,裸鼠血清中乳酸含量下降,肿瘤组织内c-Myc蛋白的表达量也发生下调。  结论:  丙酮醛具有抗结直肠癌的作用,这一作用可能是通过下调c-Myc蛋白进而影响糖酵解过程发挥的,因此丙酮醛能够干扰结直肠癌的糖酵解代谢,并有望成为抗结直肠癌有效的治疗手段。
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