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Survivin是哺乳动物细胞中凋亡抑制基因(Inhibitor of Apoptosis Protein, IAP)家族最小的成员,在胎儿组织和各种人类肿瘤中高表达.但在大多数正常成人终末分化组织中无法检测到。Survivin又是染色体乘客蛋白(Chromosomal Passenger Complex, CPC)的成员,参与细胞周期调控,是一个有丝分裂调控子。Survivin不同的结构域执行不同的生理功能,其为一个独特的双功能蛋白且在肿瘤组织中选择性过表达的特性,已成为肿瘤治疗的新药靶,以此为靶点的抗癌药物研究已成为国内外研究的热点。本文根据Survivin独特的生物功能,在本实验室之前HIV-TmSm(T34A)的研究基础上将与细胞增殖调控相关的关键活性位点117位氨基酸进行正确突变,以阻止Aurora B激酶对该位点的磷酸化,构建表达载体pRSET-TmSm (T34/117A)以及pRSET-TmSm (T117A),在大肠杆菌表达纯化后,以乳腺癌细胞B-Cap-37为受检细胞,检测重组蛋白对乳腺癌细胞周期变化与凋亡的影响。主要获得了如下实验结果：(1)利用重叠PCR技术,以实验室原有质粒pRSET-TmSm (T34A)和pGEMT-Survivin为基础,通过重叠PCR法成功构建pRSET-TmSm(T34/117A)和pRSET-TmSm (T117A)。(2)将三个表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达后,所得三种重组蛋白的包涵体由8M尿素溶解后,经SP阳离子交换柱纯化、柱上部分复性以及稀释透析复性后,再进行超滤浓缩,最终可获得最高纯度达95%的三种含二聚体的重组蛋白TATm-TmSm (T34A)、TmSm (T34/117A)和TmSm (T117A)。(3)将三种重组蛋白TmSm (T34A)、TmSm (T34/117A)和TmSm (T117A)在体外培养的人乳腺癌B-Cap37细胞上进行MTT检测,流式细胞技术进行PI单染、Annexin-v试剂盒检测、Rho123染色检测线粒体膜电位分析,说明TmSm(T34A)和TmSm(T34/117A)蛋白对B-Cap-37细胞的增殖有显著的抑制作用,细胞被阻滞在G0/G1期和G2/M期(P<0.05),且均有较好的促癌细胞凋亡作用,线粒体膜电位显著降低。而TmSm (T117A)主要使细胞阻滞在G0/G1期,对细胞凋亡和线粒体膜电位均无显著影响。通过Western blot检测发现,TmSm (T34A)和TmSm (T34/117A)激活了Caspase-3的表达,而TmSm (T117A)对Caspase-3的活性无显著影响。此外,TmSm (T34/117A)和TmSm (T117A)使Histone H3Ser10位磷酸化水平显著降低,表明这两个蛋白对AuroraB激酶的活性有显著抑制作用。