研究背景及目的:弥漫性大B细胞淋巴瘤（Diffuse Large B cell Lymphoma,DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤（NHL）中最常见的亚型,占西方成人NHL患者的30%～40%,占中国NHL患者的37.94%。大量流行病学研究证明,NHL的发生与乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV）感染密切相关。在HBV感染盛行的国家,伴有HBV感染的DLBCL患者约占所有DLBCL患者的2.73%,但在亚洲DLBCL患者中,HBV感染率约为13.3%到30.9%,远高于上述报道,提示HBV感染与DLBCL发生有密切相关。与未感染HBV的DLBCL患者相比,DLBCL合并HBV感染患者在确诊淋巴瘤时年龄小,疾病分期晚,总生存率差,无进展生存期短,提示HBV感染可能是DLBCL不良预后的因素之一。HBx抗原是由HBV四个开放阅读框架中最短的X基因编码,由145-154aa组成其分子质量约为17k Da,是一种反式作用因子。HBx不能直接与DNA相作用,而是通过蛋白-蛋白相互作用影响多种信号途径,包括调节细胞增殖、抗凋亡、迁移等。编码HBx的X基因可以随机插入宿主的基因,在宿主细胞中保持转录,同时插入的X基因导致宿主基因的不稳定性从而介导多种原癌基因激活、抑癌基因抑制等,促进肿瘤发生。而HBx抗原在DLBCL合并HBV感染患者的肿瘤进展中是否发挥作用尚无相关报道。CXCR4（CXC chemokine receptor 4,CXCR4）是一种趋化因子受体,与其配体SDF-1结合,对淋巴细胞有很强的趋化作用。CXCR4可以介导浆细胞等淋巴细胞“归巢”到骨髓,而完成自我更新,并维持骨髓内微环境稳态。CXCR4也可允许淋巴细胞在组织及淋巴管中的运行。而这种允许功能,可使淋巴瘤在诊断时即存在远处转移或骨髓受累,而这种现象在DLBCL中也可被观察到。有研究表明CXCR4表达阳性是DLBCL的不良预后因素。因此,DLBCL合并HBV感染时,肿瘤细胞中是否存在CXCR4表达水平的改变,以及CXCR4是否可通过某种途径参与肿瘤的预后不良,是本课题要解决的问题。研究方法:收集2012年至2019年,来自5个医疗中心组织（吉林大学第一医院,吉林大学中日友好医院,大连市第二医院,山西医科大学附属医院,吉林省人民医院）初次病理明确诊断为DLBCL的患者的样本及临床信息,其中96例HBsAg+DLBCL,10例HBsAg-DLBCL。10例HBsAg阳性HBV感染患者的肝组织作为阳性对照,10例无HBV感染淋巴结反应性增生患者的淋巴结组织作为阴性对照。通过IHC染色及改良IRS评分系统,明确血清HBsAg阳性DLBCL患者组织中是否可检测出HBV抗原（Pre-S1,Pre-S2,HBx,HBc）。随后应用慢病毒转染方法,建立HBx稳定表达的DLBCL细胞系,通过流式细胞术,qRT-PCR,PCR验证目标基因的插入。通过CCK8,Annexin-V/7AAD,Transwell小室检测细胞体外增殖、凋亡、侵袭及转移功能。同时建立异种肿瘤小鼠模型、PET/CT等方法,在体内观察体肿瘤的增殖,同时应用IHC,骨髓涂片,及骨髓累及情况查看疾病进展。最后,通过Western Blot,测定HBx稳定表达的SUDHL-4细胞CXCR4水平,及其下游的MEK/ERK、PI3K/AKT通路的磷酸化。明确CXCR4的作用通路,小干扰RNA实验进一步验证通路。完成HBx促进SUDHL-4细胞迁移机制的初步探索。实验结果:1、HBsAg+DLBCL组织中,应用免疫组织化学方法可检测到HBx及Pre-S2抗原表达。其中HBx表达与HBV阳性DLBCL的HBV高载量、Ann Arbor分期Ⅳ期、不良预后以及c-Myc高表达有关。而Pre-S2的表达在临床统计中未见显著性差异。2、体外实验发现稳定表达HBx的可以促使SUDHL-4和U2932细胞系增殖、迁移,抑制凋亡,但不能影响细胞侵袭。体内实验也表明HBx表达增加可促进肿瘤增长,骨髓累及明显增多。3、体内外实验发现在HBx稳定表达SUDHL-4组,CXCR4表达升高,并在体外发现CXCR4下游MEK/ERK通路被磷酸化激活。小干扰RNA敲低CXCR4时上述磷酸化现象消失,同时抑制细胞迁移,证明在HBx稳定表达的SUDHL-4,CXCR4可能是通过激活MEK/ERK通路影响细胞的生物学活性。结论:1、HBsAg+DLBCL患者肿瘤细胞中存在HBV抗原HBx及Pre-S2。2、HBx表达的HBsAg+DLBCL患者临床预后差。3、HBx可能是通过上调CXCR4并激活CXCR4/MEK/ERK磷酸化途径促进肿瘤迁移。