四川省禽源沙门氏菌耐药性及ESBLs、毒力基因流行特征的研究

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沙门氏菌是一种常见食源性致病菌,是造成禽类细菌性感染和人类食物中毒的主要病原菌。随着抗菌药物广泛使用,耐药沙门氏菌菌株迅速出现,且多重耐药性(MDR)日益严重,严重影响了抗菌药物的临床使用和治疗效果。近年来,研究表明细菌耐药性的产生和扩散,不仅与抗菌药物使用产生的诱导和选择压力有关,而且与耐药基因借助各种可移动基因元件水平传播有关。本研究以四川省不同养殖场分离的禽源沙门氏菌菌株为研究对象,研究其耐药表型、超广谱β-内酰胺酶基因(ESBLs)、多粘菌素耐药基因(mcr)和毒力基因携带情况;研究耐药基因与毒力基因共存规律及不同菌株亲缘关系。旨在了解四川省禽源沙门氏菌的流行病学、耐药特性、毒力基因分布特征等,为临床防控沙门氏菌病的发生和缓解耐药性产生提供依据。本文以2017~2021年从四川省不同养殖场采集样本,经沙门氏菌分离、纯化及鉴定,获得294株沙门氏菌临床分离菌;采用微量肉汤稀释法检测了所有菌株对10种抗菌药物的敏感性。结果显示,沙门氏菌在四川省不同禽养殖场普遍存在;菌株对不同抗菌药物呈不同水平耐药性(耐药率范围22.79~95.24%),多重耐药菌株占比为66.33%;菌株耐药率在2017~2021年随时间延长呈上升趋势,不同地区分离菌株耐药性存在差异;菌株交叉耐药性较严重,β-内酰胺类药物间存在严重的交叉耐药性(交叉耐药率为26.43~100%),不同种类抗菌药物之间也存在部分交叉耐药性(交叉耐药率为17.89%~100%)。采用双纸片扩散法初筛菌株产ESBLs酶情况;采用PCR-测序法检测所有受试菌株ESBLs、mcr基因和11种毒力基因携带状况。结果显示,16.33%沙门氏菌菌株检测出产ESBLs酶;26.87%菌株检出ESBLs基因,其中52株携带blaCTX-M-55基因,20株携带blaCTX-M-65基因,24株携带blaOXA-31基因。此外,26株菌检测出blaTEM-1基因。72株受试菌株只携带了一种耐药基因,23株携带了2种及以上耐药基因;未检出bla CTX-M-2/8/25组、blaSHV基因及mcr基因。所有菌株均检测出至少3种毒力基因,11种毒力基因检出率为18.71~100%,ESBLs阳性菌株携带更多的毒力基因。采用质粒接合转移试验检测ESBLs基因和毒力基因的水平传播能力。接合转移试验结果显示,ESBLs基因接合率为48.10%;接合子对β-内酰胺类及多西环素呈耐药性(耐药率15.79~100%);接合子均检出>15 kb质粒,89.47%接合子携带相关毒力基因。采用MLST法对沙门氏菌进行亲缘关系检测。MLST结果显示,ESBLs基因阳性菌具有11种ST型。以上研究结果表明,四川省禽源沙门氏菌耐药情况严重,且不同抗菌药物间存在交叉耐药性;ESBLs基因流行随时间延长呈上升趋势,且菌株的耐药表型与耐药基因型之间关系复杂,耐药表型受多种因素共同影响;菌株携带的耐药基因与毒力基因之间表现出正相关;质粒作为一种可移动元件,可介导ESBLs基因和毒力基因的水平传播,导致致病菌株耐药基因的广泛传播。
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