miR-214对胃腺癌细胞的影响及其靶基因的确定

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[目的]微小RNA(microRNA,miRNA)是一类对基因进行转录后水平调控的小分子非编码RNA,参与多种生理和病理过程。近年来的研究表明,miRNA能够通过负性调节其靶基因的表达水平,间接地起到癌基因或抑癌基因的作用,在肿瘤发生发展中发挥重要作用。本实验研究miR-214在胃腺癌中的表达情况,探讨miR-214对胃腺癌细胞生物学行为的影响,并确定miR-214作用的下游靶基因,同时检测该靶基因对胃腺癌细胞表型的影响,从而阐明miR-214在胃腺癌发生和发展中可能的作用机制,为肿瘤的治疗研究提供理论基础和治疗靶位。[方法]首先以real-time PCR检测miR-214在人胃腺癌组织和正常胃组织中的表达差异,然后在人胃腺癌细胞系MGC803中改变miR-214的表达水平,利用MTT、克隆形成、细胞划痕、细胞粘附和Transwell侵袭实验分析miR-214对胃腺癌细胞表型的影响。继而通过生物信息学方法筛选出miR-214的候选靶基因,并利用荧光报告载体实验验证miR-214对靶基因的直接调控作用。同时利用Real-time PCR和Western blot检测增强miR-214功能后的胃腺癌细胞中靶基因mRNA和蛋白水平的表达变化,进一步验证miR-214对靶基因的调控作用。最后利用RNA干扰技术使该靶基因表达沉默,通过克隆形成、细胞粘附和Transwell侵袭实验检测胃腺癌细胞表型的变化,进一步研究该靶基因的功能。[结果]Real-time PCR结果显示,miR-214在人胃腺癌组织中的表达明显低于正常胃组织。在MGC803细胞中,过表达miR-214后,细胞增殖能力、异质性粘附和侵袭转移能力明显受到抑制。荧光报告载体实验则证实,miR-214能够通过作用于预测靶基因GALNT7的3’非翻译区对其表达进行负性调节。而在增强miR-214功能的胃腺癌细胞中,靶基因GALNT7的mRNA表达水平和蛋白表达水平都有明显降低。最后在胃腺癌细胞中使靶基因GALNT7表达沉默后,细胞异质性粘附和侵袭转移能力减弱,与过表达miR-214后的表型相一致。[结论]miR-214在胃腺癌中呈低表达,过表达miR-214可以直接调控靶基因GALNT7的表达水平而抑制胃腺癌细胞的异质性粘附和侵袭转移能力,起到抑癌基因的作用。对miR-214在胃腺癌细胞中发挥基因调控这一机制的阐明有利于我们深入地了解恶性肿瘤的发生和发展,同时也为肿瘤的基因治疗提供一个新的线索。
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