wnt/β-catenin信号通路在紫杉醇治疗宫颈癌中的作用机制研究

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目的:研究wnt/β-catenin信号通路在紫杉醇治疗宫颈癌中的作用机制。方法:1.MTT比色法检测不同浓度紫杉醇对人宫颈癌Caski细胞株增殖的影响。收集对数生长期的宫颈癌Caski细胞,孵育至细胞贴壁后加入浓度分别为、1000.00μg/ml、100.00μg/ml、10.00μg/ml、1.00μg/ml、0.10μg/ml、0.01μg/ml、 0.001μg/ml的紫杉醇溶液各100μ1,每组溶液浓度设五个复孔,孵育48小时后,每孔加入0.5%MTT溶液20μ1,继续培养约4小时。在酶联免疫检测仪OD570nm处测量各孔的吸光值(OD),计算抑制率,得出IC50,用于下一步实验。2.紫杉醇对Caski细胞中β-catenin蛋白表达的影响24孔板孔内放入盖玻片重新培养Caski细胞,对照组未予紫杉醇处理,而实验组则加入紫杉醇(IC50终浓度6.04nmol/L),温箱中孵育48h后,β-catenin蛋白表达采用细胞免疫组织化学法检测。高倍光镜下(S-P法×400)观察染色结果,计算阳性率。3.紫杉醇对Caski细胞中c-myc的mRNA表达的影响24孔板孔内培养Caski细胞,在实验组中加入紫杉醇溶液终浓度6.04nmol/L,对照组加等体积培养液,温箱中孕育48小时后,各组细胞c-myc基因表达应用qRT-PCR法检测。结果:1.实验组和对照组β-catenin蛋白于胞质及胞核中均有表达,对照组棕黄色颗粒者更致密,呈团块状。实验组β-catenin蛋白表达阳性率为39.3%,对照组β-catenin蛋白表达阳性率为71.7%。实验组中阳性率明显减少(P<0.05)。2.经检测c-myc的mRNA在实验组和对照组Caski细胞中均有表达,癌基因c-myc mRNA含量实验组较对照组明显下降(P<0.05)。结论:紫杉醇作用Caski细胞后β-catenin蛋白表达水平下降,阻断wnt/β-catenin信号通路,下调癌基因c-myc的表达,从而抑制肿瘤细胞的增长。
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