B细胞淋巴瘤6(Bcl6),是BTB-ZF家族一员,它们均含有保守的BTB结构域和锌指结构域。作为一个转录因子,它可通过两种方式来调控靶基因的转录:一种是利用其锌指结构域直接结合DNA靶序列,另一种是通过其BTB结构域招募共抑制因子。Bcl6是机体免疫反应的一个重要的调节因子,它不仅参与巨噬细胞的分化与活化,同样也调节B淋巴细胞的增殖、滤泡性辅助性T细胞的分化等。另外,β干扰素正调节域结合因子1(Prdm1)也是一个重要的免疫调节因子,通过与Bcl6相互作用来调节免疫反应。除此以外,Bcl6和Prdm1在许多动物的胚胎发育、组织形成、炎症反应以及肿瘤的发生中具有重要的作用。Bcl6和Prdm1在哺乳动物中的研究相对比较完善,而在鱼类中的报道还相对较少。鱼类虽然有着庞大的非特异性免疫系统,但其特异性免疫系统没有哺乳动物复杂。先前本课题组已经报道了青鱂prdm1a可发生免疫应答反应,因此,本研究仍以青鱂为模式生物,首先对bcl6基因家族的mRNA进行表达谱分析,其次通过验证bcl6与prdm1的相互作用关系,以探究鱼类Bcl6和Prdm1是否有着类似于哺乳动物免疫调节的分子机制。人类BCL6(BCL6A)与BCL6B同源,它们均属于BTB-ZF蛋白家族。由于鱼类在进化过程中发生了基因组倍增,与人类BCL6同源的青鱂bcl6产生了两个同源基因。为了避免混淆,青鱂bcl6(bcl6a)的同源基因分别命名为bcl6aa和bcl6ab。青鱂bcl6b与人的BCL6B同源。通过生物信息学分析发现,bcl6基因家族在不同物种间十分保守,不同物种间bcl6蛋白的BTB结构域和锌指结构的同源性很高。定量结果显示,这三个同源基因在成年青鱂的不同组织中均有表达,在青鱂胚胎发育过程中,bcl6aa、bcl6ab和bcl6b在早期胚胎4细胞期和桑椹期高表达,而后在受精后的第三天以后才开始渐渐表达。原位杂交结果表明青鱂早期胚胎卵黄中均可检测到bcl6aa、bcl6ab和bcl6b的mRNA,然而在受精后第五天的胚胎中bcl6aa、bcl6ab和bcl6b有着不同的表达模式,推测他们在青鱂胚胎发育过程中具有不同的功能。通过免疫刺激实验发现,bcl6aa、bcl6ab和bcl6b均发生了免疫应答,且prdm1a与bcl6aa在体内存在拮抗的现象。双荧光素酶报告系统检测结果表明,青鱂bcl6aa的核心启动子位于ATG至其上游118 bp区段内,若将该段序列内2个预测的prdm1结合位点突变之后,prdm1的转录抑制效果显著下降。说明青鱂prdm1能直接结合bcl6aa的启动子来抑制bcl6aa的转录活性。此外,对青鱂bcl6b ORF测序发现,bcl6b mRNA存在4种不同的剪切形式:bcl6b.1、bcl6b.2、bcl6b.3及bcl6b.4。我们利用RT-PCR对这4种剪切体进行表达分析,并发现bcl6b.3可能在免疫应答中具有更重要的作用。总之,与哺乳动物相类似,青鱂bcl6基因家族和prdm1均参与免疫应答,而且bcl6aa和prdm1在体内可能也存在相互抑制现象。此外,我们发现的青鱂bcl6b mRNA的4种不同剪切体可能具有不同的生理功能。这些发现将为今后更好地了解鱼类免疫机制提供重要的依据。