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人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(human granucyto-macrophagecolony-stimulating factor,hGM-CSF)是一种重要的具有免疫调节功能的糖蛋白,在造血调控和免疫调节方面具有重要作用,其临床应用价值很高。目前,重组hGM-CSF有多种表达体系,其中昆虫表达体系以其自身优势逐渐脱颖而出。
家蚕是传统的经济昆虫,在我国饲养历史悠久,遗传背景清楚,其五龄幼虫丝腺是巨大的蛋白合成工厂,目前已作为生物工厂表达了多种蛋白。但是,外源基因的有效导入、整合表达水平及遗传稳定性上还存在很多不足。本研究成功构建了基于piggyBac转座子的转基因载体,该载体带有家蚕丝素重链启动子(fib-H)驱动hGM-CSF的表达盒和家蚕杆状病毒极早期基因启动子(ie-1)控制的新霉素抗性基因(neo)的表达盒。转基因载体与辅助质粒共转染BmN细胞,并利用G418筛选得持续表达hGM-CSF稳定转化细胞系,ELISA检测结果显示,hGM-CSF表达水平为1534.55 pg/106个细胞;分别利用精子介导法、基因枪、扎卵法和性腺导入法将转基因载体导入家蚕,利用绿色荧光及G418双重筛选,结合PCR和Southernblot鉴定,获得了转基因家蚕。western blot结果显示,转基因家蚕丝腺表达的hGM-CSF的分子量为22 kD。ELISA检测结果显示,hGM-CSF在丝腺中的表达水平为5.15 ng/g丝腺冻干粉。有关研究开辟了hGM-CSF表达新途径,为高水平利用家蚕提供了新方法。