卫气与神经传导相关性的理论和实验研究

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目的:建立卫气虚大鼠模型,选择益气固表之玉屏风散制剂以治疗方式或预防方式作用于模型动物,观察动物造模及干预后在神经免疫、神经营养及神经递质方面的改变。根据实验结果,阐释卫气与神经传导之间的联系,明确卫气与神经传导相关的具体环节,从神经传导角度初步探讨卫气实现其生理功能的可能机制,为卫气的感传作用提供实验依据,为气脉理论作初步探索,丰富和充实中医的卫气学说和络脉学说内容。比较玉屏风散的治疗功效和预防功效,探讨益气固表之玉屏风散对卫气虚证的神经传导功能方面的影响,为玉屏风散临床运用范围的扩展提供依据。方法:理论研究以中医学卫气理论及络脉理论为基础,阐释卫气的内涵,并对神经传导的认识进行了分析。从卫气的生成、运行、功能三个方面与神经传导相比较,论证了卫气与神经传导的密切联系。实验研究:清洁级SD大鼠,200-250g,72只,随机分为6组:正常组、卫气虚模型组、低免疫对照组、模型预防组、模型治疗组及低免疫治疗组。卫气虚模型组、模型预防组、模型治疗组大鼠进行寒、热交替刺激实验:先将各组大鼠分次放入特制铁丝笼中,每笼6只,将笼子放入-20±1℃冰柜中20min,每隔10min观察一次。取出动物后,放常规饲养室饲养(室温25±1℃),4h后进行温热刺激。即将各组大鼠分次放入40±1℃恒温箱中15min,每隔5min观察一次。取出后常规饲养。每天寒、热交替刺激一次,连续6d。低免疫对照组、低免疫治疗组采用低剂量腹腔注射环磷酰胺10mg/kg·d连续6d,造成免疫功能低下大鼠模型。正常组和卫气虚模型组、低免疫对照组:造模结束之日起灌服生理盐水,连续7天。模型预防组:造模之日起以玉屏风散冲剂灌胃1g/kg.d,连续7天。模型治疗组、低免疫治疗组:造模结束之日起以玉屏风散冲剂灌胃1g/kg.d,连续7天。灌胃结束之日摘眼球取大鼠血清,采取内固定法固定大鼠脑组织,取单侧坐骨神经及腹部皮肤。ELISA法测血清IL-2,血清及坐骨神经NGF含量;免疫组化染色检测皮肤及脑组织中P物质含量,脑组织的细胞凋亡。结果:卫气虚模型组血清IL-2含量较正常组升高,有非常显著性差异(P<0.01),与低免疫对照组比较无显著性差异(P>0.05),提示卫气虚模型具有免疫功能的变化;模型治疗组、模型预防组血清IL-2较卫气虚模型组降低,差异有非常显著性(P<0.01),模型预防组较模型治疗组血清IL-2降低,有非常显著性差异(P<0.01),提示玉屏风散对卫气虚有治疗作用,同时玉屏风散的预防作用有更好的疗效。卫气虚模型组血清NGF高于正常组,但无统计学意义;模型预防组血清NGF与卫气虚模型组、低免疫对照组、低免疫治疗组比较有非常显著性差异(P<0.01),与正常组比较有显著性差异(P<0.05);模型治疗组血清NGF与正常组、低免疫治疗组比较均有显著性差异(P<0.05),与卫气虚模型组、低免疫对照组比较有非常显著性差异(P<0.01);模型预防组血清NGF水平低于模型治疗组,但差异无统计学意义,说明玉屏风散的治疗和预防能够降低卫气虚模型的血清NGF水平。坐骨神经中的NGF水平变化与血清中的NGF水平变化并不同步,卫气虚模型组坐骨神经中的NGF含量较其它组低,与正常组比较有非常显著性差异(P<0.01),与模型预防组比较有显著性差异(P<0.05),提示卫气虚模型的周围神经中NGF含量下降,玉屏风散的预防作用可以防止此种变化。正常组、卫气虚模型组、模型治疗组、模型预防组、低免疫对照组及低免疫治疗组大鼠的腹部皮肤切片中皆可以见到棕黄色P物质阳性染色区域。卫气虚模型组与低免疫对照组皮肤组织中P物质阳性染色面积较正常组减少,有显著性差异(P<0.05),提示卫气虚损可引起皮肤P物质含量减少,此种变化可能与机体免疫机能降低有关。卫气虚模型脑组织中额叶皮质P物质阳性细胞计数低于正常组,有非常显著性差异(P<0.01),与模型预防组和模型治疗组比较有显著性差异(P<0.05),同时正常组与低免疫对照组比较有显著性差异(P<0.05),提示卫气虚模型可以降低大脑额叶皮质中P物质含量,玉屏风散的治疗和预防干预可以升高卫气虚模型脑组织中的P物质含量。低免疫对照组较正常组阳性细胞计数低,提示脑组织中的P物质改变与免疫状态相关。各组大脑额叶皮质中皆可见棕黄色TUNEL阳性细胞染色区域,其中卫气虚模型组TUNEL阳性细胞计数较正常组增加,有非常显著性差异(P<0.01),模型预防组TUNEL阳性细胞计数较卫虚组减少,有显著性差异(P<0.05),提示卫气虚变化可促进脑组织细胞的凋亡,而玉屏风散则可遏制此种变化。结论:通过寒热交替刺激制作的卫气虚模型具有免疫力低下的特征,符合卫气虚的微观辨证特点,同时发生了神经传导功能的改变,包括坐骨神经中NGF的降低,皮肤及脑组织中P物质的减少以及脑细胞凋亡的增加,说明卫气虚证候,不仅有着免疫功能的低下,也有神经系统功能的改变,证明了卫气除了共识的卫外免疫功能外还具有感应传导信息的功能,卫气与神经传导相关。益气固表的玉屏风散不仅能够改善低下的免疫力从而治疗卫气虚之证,还能通过影响血清及坐骨神经中NGF水平,影响皮肤及脑组织中P物质的含量以及脑组织中的细胞凋亡等途径来改善卫气虚所致的感应传导障碍。预防性地使用玉屏风散较玉屏风散的治疗作用更优。
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