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目的:百草枯(PQ)是一种应用于阔叶杂草控制的除草剂,又被称为对草快、一扫光。包括我国在内的140余个国家和地区得到广泛应用。近年来因自杀或者意外导致的百草枯中毒事件也呈逐年增加的趋势。百草枯对机体造成的损伤作用涉及到多种病理机制,目前百草枯引起的过氧化损伤作用得到广泛认同和重视。百草枯中毒因无特效解毒药物,对百草枯治疗策略均处在探索之中,抗氧化剂被认为是治疗百草枯中毒具有良好的应用前景的药物。5-氨基水杨酸(5-ASA)是治疗炎症性肠病的经典药物,具有良好的清除氧自由基、降低脂氧合酶活性、抑制前列腺素合成等作用。本实验研究通过测定WI-38VA13细胞内超氧化物歧化酶抑制率及丙二醛、谷胱甘肽含量,探讨百草枯浓度对WI-38VA13细胞的影响,进一步探讨5-ASA对百草枯致急性肺损伤的保护机制。方法:将购自美国ATCC公司的WI-38VA13细胞在含10%小牛血清的DMEM/F12培养基中37℃,5%CO2环境中培养,隔天换液,取对数生长期的单层培养细胞,用0.25%胰蛋白酶对细胞进行消化,分离成单细胞悬液,进行正常传代、培养。(1)MTT法分别测定不同PQ浓度、不同5-ASA浓度对WI-38VA13细胞生存率的影响,并选择合适的PQ浓度、合适的5-ASA浓度。(2)将WI-38VA13细胞进行如下处理:将WI-38VA13细胞分为PQ 0μmol/L组、PQ 100μmol/L组、PQ 200μmol/L组、PQ400μmol/L组、PQ 600μmol/L组、PQ 800μmol/L组,染毒后置于37℃,5%CO2环境中培养24小时。另将WI-38VA13细胞经过PQ 200μmol/L染毒之后,将细胞分为5-ASA 0m M干预组、5-ASA 5m M干预组、5-ASA10m M干预组进行干预处理后置于37℃,5%CO2环境中培养24小时。提取上述分组处理过后所得的细胞总蛋白。并分别测定各实验组SOD抑制率以及MDA、GSH含量。所用数据用均数±标准差(x±SD)表示,采用SPSS19.0软件进行统计,正态性检验后做方差分析,方差齐的组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),方差不齐的组间比较采用多个独立样本的秩和检验。结果:1百草枯浓度对肺成纤维细胞存活率影响各浓度组细胞存活率均有下降,其中200μmol/L至1000μmol/L剂量组与对照组相比,肺成纤维细胞存活率明显低于对照组(P<0.05)。2 5-氨基水杨酸对肺成纤维细胞存活率影响细胞在不同浓度5-ASA中培养24小时后发现20Mm、30m M剂量组与对照组相比,WI-38VA13细胞存活率明显低于对照组(P<0.05)。3百草枯浓度对肺成纤维细胞过氧化损伤影响3.1百草枯浓度对肺成纤维细胞中SOD抑制率的影响各浓度组SOD抑制率均有升高,其中PQ 200μmol/L组、PQ 400μmol/L组、PQ 600μmol/L组、PQ 800μmol/L组与PQ 0μmol/L组相比,SOD抑制率明显高于PQ 0μmol/L组(P<0.05)。并随PQ浓度的升高,SOD抑制作用更加明显。3.2百草枯浓度对肺成纤维细胞中MDA含量的影响各浓度组MDA含量均有升高。其中PQ 200μmol/L组、PQ 400μmol/L组、PQ 600μmol/L组、PQ 800μmol/L组与PQ 0μmol/L组相比,MDA含量明显高于PQ 0μmol/L(P<0.05)。并随PQ浓度的升高,MDA含量增加更加明显。3.3百草枯浓度对肺成纤维细胞中GSH含量的影响各浓度组GSH含量均有不同程度减低。其中PQ 200μmol/L组、PQ400μmol/L组、PQ 600μmol/L组、PQ 800μmol/L组与PQ 0μmol/L组相比,GSH含量明显低于PQ 0μmol/L(P<0.05)。并随PQ浓度的升高,GSH含量减少更加明显。4不同浓度5-氨基水杨酸对染毒后肺成纤维细胞干预作用的研究4.1不同浓度5-氨基水杨酸干预对染毒后肺成纤维细胞中SOD抑制率的影响各5-ASA不同浓度干预组SOD抑制率均有不同程度减低。其中5-ASA 5m M干预组、5-ASA 10m M干预组与5-ASA 0m M干预组相比,SOD抑制率明显低于5-ASA 0m M干预组(P<0.05)。其中5-ASA 10m M干预组SOD抑制效果更加明显(P<0.05)。4.2不同浓度5-氨基水杨酸干预对染毒后肺成纤维细胞中MDA含量的影响5-ASA 5m M干预组、5-ASA 10m M干预组与5-ASA 0m M干预组相比,MDA含量明显低于5-ASA 0m M干预组(P<0.05)。其中5-ASA 10m M干预组MDA含量更低(P<0.05)。4.3不同浓度5-氨基水杨酸干预对染毒后肺成纤维细胞中GSH含量的影响5-ASA 5m M干预组、5-ASA 10m M干预组与5-ASA 0m M干预组相比,GSH含量明显高于5-ASA 0m M干预组(P<0.05)。其中5-ASA 10m M干预组GSH含量更高(P<0.05)。结论:1百草枯可引起肺成纤维细胞过氧化损伤。并随着百草枯浓度升高,损伤越严重。2过氧化损伤是百草枯所致急性肺损伤中一个重要的机制。表现为SOD抑制率增高,脂质过氧化产物MDA的增多,抗氧化物质GSH的减低。3百草枯对肺成纤维细胞的氧化损伤程度,与百草枯的浓度呈正比关系,即百草枯浓度越高,肺成纤维细胞的氧化损伤程度越重。4一定浓度的5-ASA具有抗氧化、减轻脂质过氧化反应的作用,对百草枯引起的急性肺损伤有保护作用。