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Annexin B2（Anx B2）和Annexin B2（Anx B3）是新克隆出的两个非脊椎动物的膜联蛋白家族新成员。它的结构、功能和进化的分析研究,对与全面了解膜联蛋白家族的生物学功能以及进化具有重要意义。膜联蛋白家族是一类钙磷脂结合蛋白超家族,存在于大多数真核生物细胞内,有着十分广泛且重要的生理功能,如参与细胞骨架运动、调节细胞生长、形成膜离子通道、参与细胞信号转导等。这类蛋白结构上具有明显特征:C端保守区大多由α螺旋组成,其中含有主要的Ca2+磷脂结合活性位点;N端为可变区,不同家族成员N端序列组成及长度各不相同。 Anx B2和Anx B3是我们用简并引物-PCR方法从猪囊尾蚴中克隆得到的新基因。将其核酸和氨基酸序列进行同源比较和分析,确认它们是两个新的Annexin家族成员。作为扁形动物门发现的Annexin家族成员,研究Anx B2和Anx B3不仅可以了解其对猪囊尾蚴寄生、移行、生长、发育等生命活动的重要意义,为预防和治疗该类疾病提供新的途径,而且可以为整个Annexin家族的研究提供有意义的遗传及分子进化学资料。因此我们构建了Anx B2和Anx B3的融合表达载体,在大肠杆菌中实现了高表达,利用亲和层析及离子交换层析技术纯化蛋白;采用计算机同源模建、缺失体的构建研究Anx B2和Anx B3结构与功能的关系;并对它们的抗原性和抗凝血功能等方法研究了Anx B2和Anx B3的主要生物学活性。同时与Anx B1（1997年由本教研室发现）的部分功能进行比较。 本研究主要结果如下: 1.用简并引物 -PCR方法从囊尾蚴中克隆出Anx B2和Anx B3两个新基因,Anx B2和Anx B3的cDNA分别含有1065和910 bp开放阅读框,编码355、310个氨基酸,计算分子量为38682.05和35874.19 Dalton。 2.通过Blast同源性检索,表明Anx B2和Anx B3与Annexin家族成员高度同源;它具有4个典型的Annexin重复保守结构域:二级结构预测Anx B2和Anx B3均以α螺旋为主,无明显跨膜区,无信号肽,提示其为胞浆蛋白,这些与Annexin特征相符。将Anx B2和Anx B3编码序列克隆至原核表达载体pGEX-5T,亲和层析纯化后得到其融合蛋白。经N端测序证明与预测序列完全一致。根据以上的结构特点表明Anx B2和Anx B3属于Annexin家族,又由于它们N端与现有Annexin家族成