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目的:1.探讨URSA患者外周血单核细胞上Tim-3、PD-1的表达和血浆中IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ的含量,为研究URSA发病机制提供理论依据。2.探讨Tim-3、PD-1对单核细胞功能的调节,初步探讨Tim-3、PD-1在URSA中可能的作用机制。3.Tim-3或PD-1有望成为URSA免疫治疗的新靶点。方法:选取30例健康早孕妇女作为正常早孕组(NP组),30例URSA早孕患者为URSA组;采用Ficoll密度梯度离心法从研究对象的外周血中分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),流式细胞分析技术(Flow cytometry,FCM)检测2组孕妇外周血中CD14~+单核细胞(monocyte,MC)上Tim-3、PD-1的表达水平;酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测外周血浆中IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ的含量;从两组中各选取10例通过免疫磁珠技术阳性分选CD14~+单核细胞,然后分别加入anti-Tim-3、anti-PD-1或anti Tim-3+anti-PD-1阻断后,给予LPS/R848(5ug/m L)刺激48小时后流式细胞技术检测CD14~+单核细胞上PD-1或Tim-3表达水平及细胞内IL-12分泌情况,采用Graph Pad Prism5.0统计软件处理相关数据。结果:1.与NP组相比,URSA组患者外周血CD14~+MC上Tim-3、PD-1表达降低(P<0.05);相关性分析Tim-3和PD-1呈正相关(P<0.01)。2.ELISA检测结果分析:URSA组外周血浆中IL-4、IL-10浓度较NP组明显降低(P<0.01);IFN-γ、IL-6水平升高(P<0.01);MC相关细胞因子IL-12在URSA组表达水平增高,IL-12与Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)呈负相关(r=-0.6714,r=-0.5593,P<0.01);IL-12与Th1型细胞因子(IL-6、IFN-γ)呈正相关(r=0.7740,r=0.5590,P<0.01)。3.Tim-3和PD-1与细胞因子相关性分析:Tim-3和PD-1与IL-4、IL-10呈正相关(r=0.6343/0.426,r=0.5356/0.4529,P<0.05);与IL-6、IFN-γ呈负相关(r=-0.5153/-0.5649,P<0.05,r=-0.4518/-0.6543,P<0.01),与IL-12呈负相关(r=-0.5216,r=-0.540,P<0.01)。4.阻断Tim-3通路后,NP组和URSA组外周血CD14~+MC上PD-1表达水平降低;URSA组CD14~+MC上PD-1表达水平低于正常早孕组;同样,体外阻断PD-1信号后,两组CD14~+MC上Tim-3表达含量降低,URSA组低于正常早孕组(P<0.01)。5.与正常早孕相比,URSA组外周血CD14~+MC内IL-12含量增加;阻断Tim-3或PD-1后,两组患者外周血CD14~+MC内IL-12分泌量增加;在正常早孕组中,阻断Tim-3较阻断PD-1后MC内IL-12表达量增加,而在URSA组中,单一阻断Tim-3或PD-1,CD14~+MC内IL-12分泌水平变化无明显差异(P=0.0515),两组同时阻断Tim-3和PD-1后,CD14~+MC内IL-12含量较单独阻断Tim-3或PD-1时增高明显(P<0.01)。结论:1.Tim-3和PD-1参与正常妊娠的维持,CD14~+MC上Tim-3和PD-1表达失衡可能与URSA的发生有关。2.在URSA患者外周血中Th1/Th2平衡向Th1偏移,Tim-3和PD-1可能通过抑制MC对IL-12的分泌,间接调节相关细胞因子的表达,介导Th1/Th2平衡向Th1漂移,从而参与URSA的发生。3.通过体外阻断Tim-3和PD-1信号,发现Tim-3和PD-1抑制MC分泌IL-12,从而负性调节MC功能,间接调控Th1/Th2平衡。