【摘 要】
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F-2毒素是从赤霉病玉米中分离出的一种具有类雌激素作用的霉菌毒素,又称玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEA）,其主要污染玉米、小麦、大米和燕麦等谷物。动物食用或接触具有F-2毒素的饲料,会引起动物机体的生殖障碍。桦木酸（betulinic acid,BA）是一种五环三萜类天然化合物,具有抗炎、抗氧化应激、抗抑郁和抗癌等多种生物学活性。但BA对F-2毒素诱导的卵巢组织损伤是否具有保护作用以及
【基金项目】
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湖南创新型省份建设专项经费（2020NK2032）； 湖南省发展与改革委员会创新研发课题项目（202114）；
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F-2毒素是从赤霉病玉米中分离出的一种具有类雌激素作用的霉菌毒素,又称玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEA）,其主要污染玉米、小麦、大米和燕麦等谷物。动物食用或接触具有F-2毒素的饲料,会引起动物机体的生殖障碍。桦木酸（betulinic acid,BA）是一种五环三萜类天然化合物,具有抗炎、抗氧化应激、抗抑郁和抗癌等多种生物学活性。但BA对F-2毒素诱导的卵巢组织损伤是否具有保护作用以及机制如何?尚不清楚。目的:研究BA对F-2毒素诱导卵巢损伤的保护作用及其机制,为缓解F-2毒素引起的卵巢损伤提供调节靶点,探索BA在生殖调节和营养干预中的可行性。方法:将90只雌性KM小鼠,随机分为6组,分别为对照组、F-2毒素（20mg/kg）组、F-2毒素+0.25mg/kg BA治疗组、F-2毒素+0.5mg/kg BA治疗组、F-2毒素+维生素E治疗（vitamin E,VE）组、单独BA（0.5mg/kg）组。F-2毒素连续灌胃1W,建立卵巢组织损伤模型。随后BA和VE连续灌服2W。饲养结束后,对小鼠进行麻醉、解剖并采集血液和卵巢组织,进行以下实验:采用ELISA法检测血清促卵泡素（follicle stimulating hormone,FSH）,促黄体生成激素（luteinizing hormone,LH）水平;检测小鼠体内活性氧（reactive oxygen species,ROS）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glomerular peroxidase,GSH-px）水平;采用H＆E染色法观察卵巢组织形态学变化;采用电子透射显微镜观察卵巢组织超微结构变化;免疫组织化学法检测卵巢中雌激素受体β（estrogen-related receptor,ERβ）的表达水平;TUNEL法检测卵巢组织中细胞的凋亡情况;荧光定量PCR检测卵巢组织的细胞因子白细胞介素1β（interleukin-1 beta,IL-1β）、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）m RNA的表达;Western blot法检测卵巢ERα和ERβ蛋白的表达;Western blot法检测卵巢核因子相关因子2（nuclear factor erythroid 2,Nrf2）信号通路中Nrf2、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（epoxy chloropropane Kelch sample related protein-1,Keap1）、血红素加氧酶（heme oxygenase-1,HO-1）表达以及丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路中c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、p38和细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）蛋白表达及其磷酸化。结果:（1）H＆E染色发现,BA缓解F-2毒素诱导的卵巢组织生长卵泡的减少,减少卵巢组织炎性细胞浸润和出血,BA修复受损细胞器,增加内质网数目,表明BA能恢复F-2毒素诱导卵巢组织形态学和超微结构的改变。（2）BA缓解F-2毒素诱导的血清激素FSH与LH水平的下降,降低卵巢组织中ERα和ERβ的蛋白表达,说明BA通过作用于激素受体,调控激素分泌来缓解F-2毒素致卵巢的损伤。（3）BA降低血清和卵巢组织中MDA与CAT水平,增强血清SOD活性,降低卵巢ROS水平,通过发挥抗氧化作用缓解F-2毒素诱导的卵巢损伤。（4）BA极显著降低促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-αm RNA的表达,同时调控IL-10m RNA的表达,通过发挥抗炎作用缓解F-2毒素诱导的卵巢损伤。（5）BA对卵巢组织Nrf2信号通路相关蛋白表达无明显影响。（6）BA通过降低p38蛋白磷酸化水平,抑制MAPK信号通路,从而缓解F-2毒素诱导的卵巢炎症和氧化应激反应。结论:BA通过抑制p38 MAPK信号通路,提高卵巢抗氧化和抗炎能力,恢复血清激素水平,对F-2毒素诱导的卵巢损伤具有保护作用。
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