【摘 要】
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目的:抗纤益心方（KYD）是临床治疗扩张型心肌病（DCM）的有效方药,前期基础研究发现本方有抑制心肌纤维化的作用,但其具体作用机制仍不明确。研究表明RhoA/ROCK1信号通路在心肌纤维化中具重要的作用,故本研究拟通过复制DCM大鼠模型及心肌成纤维细胞模型,观察KYD抑制心肌纤维化的潜在作用机制。方法:1、参照文献及前期对本病的研究方法,通过呋喃唑酮溶液构建DCM大鼠模型。造模10周后根据心脏超声
【基金项目】
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河南省中医药科学研究专项课题（2019JDZX003）—基于RhoA/ROCK信号通路探讨抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心室重构的影响；
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目的:抗纤益心方（KYD）是临床治疗扩张型心肌病（DCM）的有效方药,前期基础研究发现本方有抑制心肌纤维化的作用,但其具体作用机制仍不明确。研究表明RhoA/ROCK1信号通路在心肌纤维化中具重要的作用,故本研究拟通过复制DCM大鼠模型及心肌成纤维细胞模型,观察KYD抑制心肌纤维化的潜在作用机制。方法:1、参照文献及前期对本病的研究方法,通过呋喃唑酮溶液构建DCM大鼠模型。造模10周后根据心脏超声心动图检测结果,将造模成功大鼠随机分为模型组,KYD高、中、低剂量组和卡托普利组,另设正常对照组,连续灌胃4周后检测相关指标。2、超声心动图检测各组大鼠心脏左室舒张末期内径（LVEDD）、射血分数（EF）和短轴缩短率（FS）等心功能指标。3、HE染色检测心肌组织病理改变,Masson染色检测心肌组织中胶原蛋白沉积水平,免疫组化检测a-SMA蛋白在心肌组织中的表达情况。4、Real-time PCR和免疫蛋白印迹法检测心肌组织中心肌纤维化相关蛋白CTGF、a-SMA、COI-1的表达水平及RhoA/ROCK1信号通路关键分子的表达情况。5、通过新生乳鼠提取心肌成纤维细胞（CFs）进行培养。用AngⅡ建立心肌成纤维细胞模型,根据给予KYD或法舒地尔干预情况将CFs分为五组,正常组,模型组,KYD组,法舒地尔组,KYD+法舒地尔组。通过Real-time PCR和免疫蛋白印迹法检测心肌纤维化因子和RhoA/ROCK1信号通路关键分子的表达。结果:1、药物干预4周后,超声检测各组大鼠左室心功能情况,与正常组大鼠相比,模型组大鼠LVEDD、LVESD明显增加（P（27）0.01）,EF、FS降低（P（27）0.01）;与模型组相比,KYD高、中剂量组和卡托普利组具有减小LVEDD、LVESD（P<0.01,P（27）0.05）,改善EF、FS的作用（P（27）0.05）,而低剂量组作用效果不显著（P（29）0.05）。2、心肌组织病理染色结果显示,相对正常组大鼠,模型组大鼠心肌组织中心肌细胞肿大,紊乱,坏死,肌红蛋白排列紊乱,胶原蛋白增多沉积,a-SMA表达明显增加;给予KYD干预大鼠心肌组织中心肌细胞水肿减轻,肌红蛋白排列较前好转,但低剂量组改善不明显,仍有大量胶原蛋白沉积。3、通过检测心肌组织中RhoA/ROCK1信号通路关键分子及心肌纤维化相关蛋白的表达水平,发现相对于正常组大鼠,模型组大鼠心肌组织中RhoA/ROCK1通路关键分子及心肌纤维化相关蛋白表达水平明显升高（P（27）0.01）;KYD高、中剂量组和卡托普利组具有不同程度的降低作用（P（27）0.01,P（27）0.05）,而低剂量组改善不明显（P（29）0.05）。4、通过检测各组大鼠心肌组织中RhoA、ROCK1、MLC、CTGF m RNA的表达,发现相对于正常组大鼠,模型组大鼠心肌组织中RhoA、ROCK1、MLC、CTGF m RNA表达水平明显升高（P（27）0.01）;KYD高、中剂量组和卡托普利组具有不同程度的下调作用（P（27）0.01,P（27）0.05）,而低剂量组改善不显著（P（29）0.05）。5、在Ang II诱导的心肌成纤维细胞模型中,KYD可以抑制CFs模型中CTGF、a-SMA、COI-1的表达,KYD和法舒地尔具有相似的作用可以抑制RhoA、ROCK1、p-MLC的表达水平（P（27）0.01,P（27）0.05）。结论:1、在DCM大鼠心肌纤维化过程中存在RhoA/ROCK1信号通路的过度表达。2、抗纤益心方可以改善DCM大鼠心功能,改善心肌纤维化的病理损害。3、抗纤益心方可以抑制心肌成纤维细胞的转化。4、抗纤益心方可能通过下调RhoA/ROCK1信号通路发挥抑制心肌纤维的作用。
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