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目的:随着人们生活水平的提高,全世界糖尿病的发病率逐年升高,发展中国家尤为明显,糖尿病已经成为临床上最重要的内分泌代谢性疾病。糖尿病(diabetes mellitus,DM)是以高血糖为主要表现的慢性代谢性疾病。2型糖尿病(T2DM)是由多种因素导致的遗传异质性疾病,目前对发病机制的认识仍然不足。其主要病理生理学基础为胰岛素抵抗和β细胞功能缺陷。胰岛β细胞功能障碍是其主要病因之一。既往认为糖尿病的发生主要是由于β细胞凋亡导致β细胞数量减少。而最新研究发现β细胞去分化可能是β细胞数量减少的重要原因。研究发现多种原因能够刺激胰岛β细胞产生内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS),引起胰岛β细胞去分化,进而引起胰岛素分泌下降。胰高血糖素样肽1(GLP-1)是进食后由肠道L细胞产生的肽类激素,其天然存在形式是GLP-1(7-36a),在体内经二肽基肽酶-4(DPP4)降解为(9-36a),研究显示GLP-1及其代谢产物对胰岛β细胞具有保护作用,但其作用机制尚需进一步研究。本文着重观察GLP-1(7-36a)及代谢产物(9-36a)在胰岛β细胞内质网应激导致β细胞去分化中的作用并初步探讨其机制。并通过应用信号通路蛋白的抑制剂,初步探讨GLP-1(7-36a)及(9-36a)发挥生理作用的可能信号通路。方法:(1)培养胰岛β细胞,用0.2mM棕榈酸(PA)和20ug/L TNFα干预细胞24h,免疫印记分别测定蛋白表达情况;检测棕榈酸(PA)、肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导内质网应激:测定葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)。测定各种细胞标记物表达情况(β细胞:胰十二指肠同源盒基因(PDX-l)、Nkx6.1;α细胞:MafB;祖细胞:Sox-9、八聚体结合转录因子4(Oct-4)的表达。(2)培养胰岛β细胞,用GLP-1(7-36a)与(9-36a)分别预处理1h,再加入PA、TNFa干预24h,检测内质网应激水平与β细胞去分化水平。(3)培养胰岛β细胞,分别用100nM GLP-1(7-36a)及代谢产物(9-36a)处理细胞30min,抑制剂SCH/Compound C/STO609处理细胞1h,以及先用抑制剂预处理细胞1h然后再加入GLP-1(7-36a)及(9-36a)处理30min,检测信号通路蛋白AMPK、P42/44及CamKII的表达。实验数据采用SPSS24.0统计学软件进行分析,多个样本均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用S-N-K检验,以P<0.05有统计学差异。结果:0.2mM的PA和20ug/L TNFα培养24h均诱导胰岛β细胞内质网应激(p<0.05),引起β细胞去分化,β细胞标志物表达下降,差别具有统计学意义(p<0.05),α细胞及祖细胞标志物无明显改变,差别无统计学意义(P>0.05)。GLP-1及代谢产物可改善胰岛β细胞内质网应激,使PDX-l、Nkx6.1蛋白表达增加(p<0.05),GLP-1(7-36a)及(9-36a)引起P-P42/44蛋白表达增多(p<0.05),而在加入抑制剂SCH后,其表达明显下降(p<0.05)。结论:1.棕榈酸(PA)、TNFα诱导胰岛β细胞内质网应激,引起胰岛β细胞去分化。2.GLP-1(7-36a)及代谢产物GLP-1(9-36a)保护内质网应激引起的胰岛β细胞的去分化。3.GLP-1(7-36a)及代谢产物GLP-1(9-36a)可能通过激活ERK信号通路发挥生理作用。