沙棘为传统藏医、蒙医习用药材,具有较高的药用价值。本实验室前期的研究发现,富含黄酮的沙棘籽渣醇提物具有调节糖和脂质代谢异常的生物活性,但其机制尚未阐明。在此基础上,本文对沙棘籽中总黄酮(TFSH)的提取工艺进行优化,得到纯度较高的沙棘籽总黄酮,而后研究了沙棘籽总黄酮及槲皮素、绿原酸对脂肪细胞糖代谢的影响及其作用机制,并进一步采用db/db糖尿病小鼠模型,探究了沙棘籽总黄酮对糖及脂质代谢紊乱的调控及作用机制,为沙棘资源的深度开发和利用提供理论依据。本论文的主要研究内容及结论如下：(1)在本实验室乙醇回流法提取总黄酮的工艺基础上,采用响应面法对提取工艺进行优化,得到最佳的提取条件为：提取温度79.0℃、提取时间2.05 h、料液比1：27.5、乙醇浓度59.37%、提取次数3次。在最优条件下提取得到含量较高的总黄酮,实际得率为2.985%；对沙棘籽总黄酮粗提物进行纯化,检测TFSH的纯度为85.03%。此外,体外活性研究发现TFSH具有DPPH自由基和羟自由基清除能力及抑制A549肺癌细胞增殖的作用。(2)采用体外诱导分化的成熟脂肪细胞,研究沙棘籽总黄酮及其中的单体槲皮素和绿原酸对脂肪细胞的糖代谢过程中葡萄糖消耗的影响及可能的作用机制。结果表明：400 μg/mL的TFSH能够极显著促进脂肪细胞的葡萄糖消耗,并能有效提高CAP的mRNA表达水平及GLUT1的mRNA、蛋白表达水平,降低瘦素、抵抗素、’TNFα的mRNA表达,同时pAMPK/AMPK升高。提示TFSH可能通过激活CAP/Cb1通路、AMPK通路,从而上调GLUT1的表达来促进脂肪细胞消耗葡萄糖；并可能通过抑制脂肪细胞因子瘦素、抵抗素、TNFa的生成来发挥作用。对沙棘中两种单体的活性评价显示：槲皮素和绿原酸均能明显促进脂肪细胞的葡萄糖消耗,此外,两者还能显著促进胰岛素刺激条件下脂肪细胞的葡萄糖消耗。机制探究实验显示：100μmol/L的槲皮素可上调GLUT4、脂联素的mRNA表达,促进GLUT1的mRNA及蛋白表达,同时下调‘TNFα的mRNA表达。提示槲皮素促进脂肪细胞葡萄糖消耗的作用一方面可能是通过上调GLUT1的表达来实现,另一方面,可能与促进脂联素以及抑制TNFα的表达有关。与胰岛素单独作用相比,100μmol/L的槲皮素与100nmol/L胰岛素联合作用时可增加AKT的磷酸化水平,增加CAP、PPARγ、脂联素和GLUT1的1mRNA表达水平。提示槲皮素对胰岛素促进脂肪细胞葡萄糖消耗的加强作用与激活CAP/Cb1及PI3K-AKT通路、促进PPARγ、GLUT1、脂联素表达相关。25μmol/L的绿原酸可增加AMPK的磷酸化水平,上调PPARy的mRNA表达和蛋白表达,同时上调CAP、PI3K的mRNA表达,下调TNFα的mRNA表达。说明绿原酸显著促进脂肪细胞葡萄糖消耗的作用一方面可能通过激活CAP/Cb1通路、PI3K通路和AMPK信号通路,上调PPARy的表达,另一方面,可能与下调TNFα的mRNA表达有关。同样,与胰岛素单独作用相比,绿原酸与100nmol/L胰岛素联合作用时可增加AMPK的磷酸化水平,上调PPARγ、GLUT4和GLUT1的蛋白表达,同时GLUT4、CAP、脂联素的mRNA表达增加,抵抗素的mRNA表达下降。提示绿原酸对胰岛素促进脂肪细胞葡萄糖消耗的增强作用可能与激活CAP/Cb1和AMPK通路,促进GLUT1、PPARγ、GLUT4的表达相关,也可能与脂联素表达上调、抵抗素表达下调有关。(3)采用C57BL/6-db/db糖尿病小鼠模型,探究沙棘籽总黄酮对2型糖尿病小鼠糖和脂质代谢紊乱的调节作用。TFSH(100mg/kg,300 mg/kg)灌胃给予8周龄的db/db小鼠,连续8周,与db/db对照组小鼠相比,TFSH处理组小鼠的体重显著降低；血浆TC和FFA含量显著降低,LDL-C/TC比值明显降低,而HDL-C/TC比值显著升高。上述结果表明TFSH具有控制体重增长,改善db/db小鼠血脂紊乱的功效。此外,连续给予TFSH还能明显降低db/db小鼠的空腹血糖,及血浆GSP含量,表明TFSH能改善db/db小鼠的血糖紊乱,具有降血糖活性。进一步探究发现：TFSH处理组db/db小鼠胰岛素分泌增加,胰岛β细胞的功能指数升高,胰岛面积减小,表明TFSH能够改善db/db小鼠胰岛β细胞的功能；同时,TFSH处理组db/db小鼠脂联素分泌升高,瘦素分泌降低,胰岛素抵抗指数下降,显示TFSH具有增加db/db小鼠胰岛素敏感性、降低胰岛素抵抗的作用。综上所述,沙棘籽总黄酮及其中的单体槲皮素、绿原酸在3T3-L1脂肪细胞的糖代谢过程中均显著影响糖代谢过程中重要转录及调控因子的表达。沙棘籽总黄酮在2型糖尿病小鼠模型上还显示出明显的调节血糖、血脂紊乱的作用。本研究为沙棘籽总黄酮、槲皮素、绿原酸的应用提供了良好的理论基础和依据。