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本论文分为两个部分,第一部分是关于SSX2IP与14-3-3家族之间的相互作用及功能研究。第二部分是关于ITPKC和PPP3CC之间的相互作用及功能研究。 在论文的第一部分中,我们首先以SSX2IP作为诱饵蛋白对成人肝cDNA文库进行酵母双杂交筛选,结果筛选到了SSX2IP的一个新相互作用蛋白14-3-3η。利用GSTPull-down实验和哺乳动物细胞内免疫共沉淀实验验证了SSX2IP与14-3-3η之间相互作用的真实性。免疫荧光共定位实验发现,当单独转染SSX2IP时,它在细胞质和细胞核内均有表达,且在细胞核内的表达多于细胞质;当与14-3-3η共转染时,SSX2IP在细胞质的表达量增加,可以与14-3-3η共定位于细胞质中。利用CCK-8法检测SSX2IP和14-3-3η对于HEK293T细胞增殖的影响,发现共转染SSX2IP和14-3-3η后,细胞的生长速度比分别单独转染SSX2IP或14-3-3η时均有所提高,推测SSX2IP和14-3-3η的相互作用可在一定程度上促进细胞的增殖。 14-3-3是一类在真核生物细胞中普遍存在并高度保守的蛋白质家族。脊椎动物中,14-3-3蛋白共包括有七种亚型,14-3-3η就是其中之一。利用相同的方法检测14-3-3家族其它6个成员与SSX2IP之间是否存在相互作用关系,结果发现,14-3-3家族中共有4个成员与SSX2IP之间有相互作用,而其余3个成员与SSX2IP不存在相互作用。 在论文的第二部分中,我们以ITPKC为诱饵蛋白对成人肝cDNA文库进行酵母双杂交筛选,结果筛选到了其相互作用蛋白——PPP3CC。利用免疫共沉淀实验,我们在外源过表达水平上验证了ITPKC和PPP3CC之间的相互作用关系。免疫荧光共定位实验发现,ITPKC可与PPP3CC共定位于细胞质中。当ITPKC和PPP3CC共转染细胞时,随着PPP3CC表达量的增加,ITPKC的表达量也呈上升趋势,推测PPP3CC的过表达可以对细胞中ITPKC的表达量产生影响。ITPKC是川崎病易感基因,因此,PPP3CC和ITPKC的相互作用及在表达上的相关性可能为研究川崎病的致病机理提供新的线索。