本研究对猪流行性腹泻病毒（PEDV）强毒株进行了细胞传代培养致弱试验。制备了抗PEDV的单克隆抗体。利用双抗体夹心法原理,运用胶体金免疫层析技术,初步建立了猪流行性腹泻（PED）的快速检测方法,取得了如下研究进展。将PEDV中国分离株CHYJ130330株从150代开始连续传代至214代,对收集的病毒液每10代测定TCID₅₀,结果表明到TCID₅₀随着传代下降。通过口腔灌服3日龄仔猪进行攻毒试验,结果标明,强毒组、F150组、F200组、空白组发病率依次为100%、100%、0%、0%,死亡率依次为60%、0%、0%、0%,RT-PCR PEDV病毒阳性检出率依次为100%、80%、20%、0%。结果表明病毒经传代培养后,毒力有所减弱。将猪流行性腹泻病毒（PEDV）中国南方分离株CHYJ130330株用Vero细胞扩大培养,通过硫酸铵沉淀及蔗糖密度梯度离心将PEDV纯化、浓缩。以PEDV为免疫原,免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA筛选、有限稀释法多次克隆,获得11株能稳定分泌抗PEDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经小鼠腹腔接种,测得8株单抗效价在1:1.6×10⁴以上,6株有较好的特异性。对其中效价高、特异性好的几株进行了纯化,通过硫酸铵沉淀及ProteinG亲和柱层析法纯化腹水获得了高纯度的单克隆抗体。对纯化后单抗用双抗体夹心ELISA法进行配对。其中细胞株5A10和3A11分泌的抗体配对成功,在此基础上建立了胶体金免疫层析方法。通过对所建立胶体金免疫层析方法进行评价,重复性试验表明该方法重复性好;检测PEDV阳性标准样的最低检测限为7.8×10³TCID₅₀/mL,表明该方法敏感性较高;检测伪狂犬病病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和传染性胃肠炎病毒（TGEV）结果为阴性,表明该方法特异性好。用该方法和RT-PCR方法对115份临床病料进行对比检测,结果显示两种方法阳性检出率分别为55.6%和53.9%,与RT-PCR符合率为93%。本方法的建立为开发快速检测PEDV的胶体金免疫层析试纸条产品奠定了基础。