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大环内酯类药物是兽医临床常用的一类抗生素，常用的品种有泰乐菌素（TYL）、替米考星（TMC）、乙酰异戊酰泰乐菌素（ATYL），主要用于治疗家畜和家禽的呼吸系统疾病。随着这些药物的广泛应用，它们在动物性食品中的残留逐渐受到重视。欧盟于1999年首先禁止泰乐菌素作为饲料添加剂使用，之后各国也相继制定了一系列的残留控制体系。在大环内酯类抗生素的残留检测方法中，免疫分析法以其特异性高、简单、灵敏、快捷的特点而被广泛应用。本研究对泰乐菌素进行了分子改造，将其分别用6-氨基己酸和对氨基苯乙酸进行衍生化，合成两种新型半抗原（STYL、PTYL）。然后，采用混合酸酐法将合成的半抗原分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）连接，制备两种免疫原和两种包被原（STYL-BSA、STYL-OVA、PTYL-BSA、PTYL-OVA），半抗原与载体蛋白的结合比范围在13-16:1之间。以两种免疫原分别免疫Balb/c小鼠，利用间接ELISA方法评价不同的包被抗原与抗体组合，经过多次试验，表明STYL-BSA具有较好的免疫特性。选择血清效价最高且对泰乐菌素有特异性的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞。以间接竞争ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞，采用有限稀释法经过多次筛选得到两株阳性杂交瘤细胞株。采用小鼠体内诱生法产生腹水，以饱和硫铵法进行纯化，得到单克隆抗体。所得抗体能同时识别泰乐菌素、乙酰异戊酰泰乐菌素、替米考星和泰乐菌素的代谢物脱藻糖泰洛星。以该抗体为基础，建立起一种检测4种大环内酯类抗生素的ELISA方法。该法对上述药物的交叉反应率范围为46%-100%，IC50范围为15.8-34.0ng/mL，最低检测限（IC10）范围为1.6-2.0ng/mL。然后，将4种药物分别在空白牛奶中按照20-100ng/mL的浓度添加，ELISA方法检测，添加回收率范围为78%-96%，变异系数为4.2%-11.4%。因此，本方法可以作为一种快速筛选工具用于动物源性食品中大环内酯类抗生素的多残留检测，以提高检测效率，保障动物性食品安全。