背景和目的：肿瘤是全球范围内严重危害人类生命健康的重大疾病之一，世界上每年因罹患肿瘤而丧失生命的人约占总死亡人数的20％。随着科学家们对原发肿瘤的生长、浸润、转移和复发以及组织微环境等因素研究的逐步深入肿瘤的诊断与治疗方法也取得了很大进展，目前已有的治疗手段包括手术、放疗和化疗等，但是这些治疗仍然存在治愈率低、药物副作用大、肿瘤转移与复发等诸多问题。近年来，越来越多的研究提示肿瘤的起源、发生、转移与复发的原因可能是肿瘤内存在极少量具有干细胞特性的细胞，即肿瘤干细胞(Tumor Stem Cells，TSCs)。肿瘤干细胞有以下特点：第一、自我更新能力；第二、多向分化潜能；第三、高致瘤性；第四、存在与干细胞相似的信号传导通路；第五、高迁徙和转移能力；第六、对射线和药物不敏感；第七、多药抗药性。CD133作为肿瘤干细胞的表面标志物最早是在脑肿瘤中发现的，Singh等从神经节胶质瘤、星形胶质母细胞瘤中成功地分离出 CD133+肿瘤干细胞，并将其在体外无血清培养基中进行细胞培养，发现这种细胞能形成神经球样克隆，具有自我更新和分化能力，同时能在免疫缺陷小鼠体内形成肿瘤，肿瘤细胞的亚型；与原位肿瘤一样，而且也能连续传代。另外，研究证明 CD133+细胞在肝、胰腺癌、结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、喉癌、胃癌、肾癌等多种实体瘤研究中发挥重要作用，CD133成为分离培养和鉴定肿瘤干细胞特异性标志之一。近几年针对肿瘤干细胞的研究，更注重从其分子和基因水平等方面进行分析，结果表明 CD133这种细胞表面粘附分子与其他细胞因子以及肿瘤微环境的形成，共同参与肿瘤的生长、转移、复发、细胞信号传导通路的调节以及放化疗抵抗的作用。因此，我们可以从阻断肿瘤干细胞的细胞周期、阻断信号传导通路的激活、改变放化疗作用靶点、干扰肿瘤干细胞微环境等方面开展针对肿瘤干细胞表面标志物CD133以及肿瘤相关途径的靶向治疗。所以，制备高特异性抗CD133的人源性单克隆抗体有重要意义。　　方法：人CD133是五次跨膜的糖蛋白由两个长胞区，我们用PCR扩增 CD133两段胞外区，分别将扩增的两段胞外区与PGEX4T-1(6*HIS)质粒结合后将连接产物转入BL21大肠杆菌中培养，IPTG大量诱导表达，镍柱纯化。以纯化后的CD133-loop1-(HIS)6和CD133-loop2-(HIS)6蛋白作为靶分子，对噬菌体抗体库进行固相筛选，应用夹心ELISA选择出结合较强的克隆。　　结果：成功表达出CD133两段胞外区，经ELISA鉴定表明纯化后的两段CD133胞外区抗原与CD133抗体有特异性的结合。因本次使用的scFv抗体库为无偏性的天然文厍，所以采用了五轮筛选，前两轮采用中等的严密度，避免高亲和力但低表达的噬菌体克隆丢失。后三轮的严格筛选达到了筛选目的。第五轮噬菌体的投入产出率比第三轮增加了42.5倍。将五轮筛选获得的多克隆噬菌体均进行ELISA检测，发现五轮筛选的OD450nm吸光度值逐渐升高。以第五轮筛选后获选后的多克隆噬菌体感染宿主菌 XL1-blue，挑取其中的单个菌落，制备出101株单克隆噬菌体抗体，用ELISA测定其抗原结合活性，以P/N值>2.1为阳性克隆，共计挑选87个阳性克隆，阳性率为86.1％。挑取其中6个P/N值>8的阳性克隆做进一步研究。　　结论：本研究以噬菌体展示技术得到了人源性抗CD133的单克降抗体，为进一步深入研究该人源化抗体的生物功能及应用前景等奠定了基础。