基于RNA-seq延边黄牛肌内脂肪候选基因的筛选与表达分析

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本试验选用延边黄牛为研究对象,利用RNA-seq技术对高脂肪与低脂肪组的背最长肌进行测序,构建基因表达谱,获得差异表达基因。对差异基因进行GO功能注释和pathway通路分析,并通过qRT-PCR技术对差异表达基因进行验证,以发现与肉质性状相关的候选基因与调控通路。将筛选出来的ATF3基因与KCTD15基因进行表达规律分析,对组织表达与肌内脂肪沉积的作用进行研究,为延边黄牛肉质调控提供了可鉴的遗传学资料。本研究主要结果如下:(1)通过对比延边黄牛高脂肪与低脂肪组的肉质性状,低脂肪组的剪切力值极显著高于高脂肪组(P<0.01)。低脂肪组水分含量显著高于高脂肪组(P<0.05)。胴体性状比较结果发现低脂肪组的大理石花纹等级级别极显著高于高脂肪组(P<0.01)。(2)高脂肪组与低脂肪组之间共有38个差异基因,其中上调基因有25个,下调基因有13个。GO分析结果表明,有38个基因在生物学途径(Biological process),38个基因在细胞组分(Cellular component),28个基因在分子功能(Molecular Function)中找到注释。对延边黄牛高脂肪与低脂肪组背最长肌差异表达基因进行KEGG pathway分析,其中有269条通路,与脂肪代谢有关的通路主要包括脂肪酸生物合成(Fatty acid biosynthesis)、PPAR 信号通路(PPAR signaling pathway)、Wnt 信号通路(Wnt signaling pathway)、ECM 受体相互作用(ECM-receptor interaction)和粘着斑(Focal adhesion)等。(3)选择4个差异表达基因和2个非差异表达基因,上调基因有ATF3和KCTD15,下调基因有MYOD1和COL3A1,非差异表达基因有GPAM和FABP3基因。通过荧光定量PCR试验进行验证,结果表明荧光定量PCR试验验证的基因表达水平与RNA-seq测序得到的基因表达水平一致,表明RNA-seq测序结果可靠。(4)从差异表达基因中选取ATF3和KCTD15基因进行了组织表达分析。发现ATF3基因在延边黄牛7个组织中均有表达,其中脂肪组织均极显著高于其他组织(P<0.01)。KCTD15基因在延边黄牛7个组织中均有表达,其中脂肪组织极显著高于其他组织(P<0.01)。在肌肉组织中,西冷中的ATF3基因表达量与IMF含量呈极显著正相关(P<0.01),KCTD15基因表达量与IMF含量不相关。
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