论文部分内容阅读
目的：新生儿缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)是指围产儿因宫内窘迫或出生后多种心肺疾病引起的脑严重缺氧缺血性损害,多发生于有严重窒息的足月新生儿,是新生儿死亡或远期运动、智力障碍的常见原因。研究证实,基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在缺氧缺血后的神经损伤中发挥保护作用。但是其表达模式以及保护机制尚不完全清楚。因此,本研究通过：①动物实验部分采用免疫荧光技术检测实验小鼠脑组织SDF-1表达水平；采用RT-PCR技术检测海马区SDF-1 mRNA的表达水平；采用western blot技术检测海马区ki-67蛋白表达水平。②临床实验部分采用酶联免疫技术(ELISA技术)检测血清SDF-1、白细胞介素-8(IL-8)与肿瘤坏死因子-α (TNF-α)表达水平。共同探讨SDF-1对HIBD神经损伤的保护作用,为探索新生儿缺氧缺血性脑损伤的有效治疗方法提供理论依据。方法：1.动物实验方法：将90只购自山东大学实验动物中心的健康新生7日龄小鼠按随机数字法分为三组,即：空白组、HIBD(缺氧缺血性脑损伤)模型组、SDF-1组,每组各30只。三组均按照24h、3d及7d三个观察时间点再随机均分为三个亚组。HIBD模型组、SDF-1组参照Rice法和国内吴婉芳等的方法建立新生小鼠缺氧缺血性脑损伤模型。SDF-1组腹腔内注射外源性SDF-1,对照组及空白组给予等量生理盐水。造模完成后采用免疫荧光技术检测实验小鼠脑组织SDF-1表达水平；采用RT-PCR技术检测海马区SDF-1 mRNA的表达水平；采用western blot技术检测海马区ki-67蛋白表达水平。2.临床实验方法：将于2012年7月至2014年11月在我院新生儿监护病房收治的82例诊断为新生儿缺氧缺血性脑病的患儿作为实验组,即HIBD组,诊断标准依据中华医学会儿科学分会新生儿学组制定的《新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准》,随机选取同期产科出生的70例健康新生儿为对照组。依据诊断标准将HIBD组分为轻、中、重三个亚组,其中轻度组38例,中度组25例,重度组19例。[3,4]采用酶联免疫法检测各组及亚组新生儿生后24小时内血清SDF-1、IL-8TNF-α的表达水平。将重度组分为A组(急性期,即生后24小时内,且治疗前)及B组(恢复期,生后7天,且治疗后),亦采用酶联免疫方法测定两组患儿血清SDF-1、IL-8、TNF-α的表达水平。结果：1.动物实验结果：(1)SDF-1表达：空白组新生小鼠脑组织内源性SDF-1的表达极少且随时间变化表达量基本不变。HIBD模型组小鼠脑组织在HIBD 24小时后SDF-1表达就已经增加,3天达到峰值,之后下降。且任一时间点的表达均强于空白组。表达差异具备统计学意义(P<0.05)(2)Ki67蛋白表达：空白组小鼠脑组织仅见少许Ki67表达。HIBD模型组小鼠脑组织在HIBD 24小时后Ki67蛋白表达逐渐增多,与空白组相比较,两组各时间点表达差异具有统计学意义(P<0.05)。随时间延长,ki-67蛋白表达逐渐增强,各时间点表达差异具有统计学意义(P<0.05)。 SDF-1组经腹腔给予外源性SDF-1治疗后ki-67表达明显增强,各时间点表达与相应HIBD模型组表达差异有统计学意义(P<0.05)。2.临床实验结果(1)HIBD组患儿生后24小时内血清中SDF-1、IL-8及TNF-α的表达水平均明显高于同期对照组新生儿,差异有统计学意义(P<0.05)(2) HIBD组患儿血清SDF-1、IL-8及TNF-α的表达水平与缺氧缺血性脑损伤程度成正比,即重度组高于中度组,中度组高于轻度组,各组比较有统计学意义(P<0.05)。(3) HIBD重度组B组患儿血清SDF-1、IL-8及TNF-α的表达水平较A组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：1.SDF-1在脑缺氧缺血后表达上调,且表达趋势有时间窗。2.外源性SDF-1促进ki67的表达,发挥神经细胞替代和组织修复功能,从而对缺氧缺氧缺血性脑损伤发挥一定的保护作用。3. SDF-1、IL-8及TNF-α可反映缺氧缺血性脑损伤的严重程度,为以后将SDF-1作为临床评估HIE严重程度的一个指标提供了依据。4.本研究将内源性神经细胞增生与免疫学机制相结合,对于SDF-1干预新生儿缺氧缺血性脑损伤的治疗提供理论支持。