论文部分内容阅读
目的:探究乳酸对人血管平滑肌细胞(Human Vascular Smooth Muscle Cells,HVSMC)表型转化的影响。方法:本研究通过结合临床与基础研究,多维度探讨乳酸对外周动脉疾病患者血管平滑肌表型转化的影响。1)临床研究:纳入2018年重庆医科大学收治的外周动脉疾病患者和正常体检成年人,收集患者现病史、既往史、基本生命体征、实验室检查结果等数据,利用多种统计学方法解析各项数据。2)基础研究:通过三气培养箱培养HVSMC,用不同浓度乳酸(0m M,4m M,8m M)刺激HVSMC0h、12h、24h、48h后,收集细胞。利用RT-PCR、Western Blot和ELISA方法检测表型转化和炎症因子相关基因和蛋白的表达变化,筛选最适宜的乳酸浓度和刺激时间。根据筛选到的乳酸浓度和处理时间,将培养的HVSMC分别予AKT抑制剂(AKT IV,10μM)和腺病毒沉默AKT处理。利用RT-PCR、Western Blot和ELISA方法检测表型转化和炎症因子相关基因和蛋白的表达变化。通过RT-PCR和Western Blot来检测AKT相关信号通路基因和相关蛋白的表达结果:1)临床研究发现,与对照组相比,外周动脉疾患者性别、吸烟习惯、血清乳酸上有明显的统计学差异。外周动脉疾病患者男性更多,有更多吸烟既往史,并且血清乳酸明显上升。2)基础实验,在不同浓度乳酸(0m M,4m M,8m M)刺激人血管平滑肌细胞0h、12h、24h、48h后,根据RT-PCR和Western Blot结果发现,平滑肌细胞蛋白-22α(Smooth Muscle Protein-22α,SM-22α)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)(收缩表型标志蛋白)随乳酸浓度增加而降低,随培养时间增加而降低。而炎症因子:白细胞介素-6(inflammatory factors Interleukin-6,IL-6)和重组人趋化因子-8(Recombinant Human C-X-C motif chemokine 8,CXCL-8)的基因和蛋白表达,均随乳酸浓度的增加而增加,随培养时间的增加而增加。在8m M乳酸刺激下,磷酸化AKT(Phosphorylation-AKT,p-AKT)在12h时达到峰值,提示AKT可能参与乳酸对HVSMC表型转化的调控。与乳酸模型组相比,AKT腺病毒沉默组和AKT抑制剂组,AKT通路蛋白受到明显抑制。SM-22α和α-SMA的基因表达和蛋白表达均较模型组有所增加,而IL-6和CXCL-8相关炎症因子的基因和蛋白表达则较模型组降低。结论:HVSMC的炎症表型转化与乳酸存在明显的相互关联,并且其炎症表型转化程度存在明显的时间依赖性和浓度依耐性;乳酸可能通过AKT途径影响HVSMC表型转化,未来可能为外周动脉疾病和动脉粥样硬化的治疗提供一定的思路。