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铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo),又名黑节草、铁皮兰,为兰科石斛属多年生附生性草本植物,属国家二级保护的贵重濒危药材,是我国最珍贵的中药材之一。相关文献研究显示,目前对铁皮石斛的研究主要集中在多糖,部分研究内容涉及到氨基酸类或生物碱类。现代药理研究表明,铁皮石斛具有诸多药用价值,如抗衰老、抗肿瘤、降低血糖和提高免疫等作用。然而,铁皮石斛价格昂贵,市场来源繁多且混、伪品较多,给收购、开发及其产品质量控制带来不便。本课题主要对铁皮石斛的相关文献,总氨基酸的含量测定,总氨基酸的提取工艺,药材氨基酸部位的指纹图谱及其质量评价进行研究,以期通过本课题的研究,为铁皮石斛药材质量控制提供科学依据,为后续开发应用奠定基础。 文献研究:通过从种质资源分布、形态特征与生物学特征、鉴别、人工栽培技术进展、化学成分、药理作用、应用和研究前景等方面对铁皮石斛进行综述。对氨基酸的性质、氨基酸的研究现状、氨基酸的提取、纯化、分析等方面进行了归纳总结。同时对中药指纹图谱的研究概况包括背景、来源和概念、分类、解析方法和应用等方面进行总结,为进一步设计和实施实验方案提供理论依据。 铁皮石斛总氨基酸含量测定方法的建立:分别考察了测定波长、显色反应中参与反应缓冲盐pH值、缓冲盐用量、显色剂用量、沸水浴加热时间和方法学考察。并对铁皮石斛的干品、鲜品和原球茎的氨基酸进行测定。 铁皮石斛总氨基酸提取工艺研究:分别对提取溶媒及方法、提取温度、提取时间、提取次数、提取溶媒倍量进行单因素考察,确定单因素水平。选择因素和水平采用L9(34)正交设计,考察提取溶媒倍量、超声提取时间、提取次数三个因素对提取的影响,确定铁皮石斛最佳的提取条件为:加20BV0.1mol/L HCl,超声提取30 min,提取1次。 铁皮石斛氨基酸部位的指纹图谱建立:分别考察了供试品溶液制备条件、色谱条件的筛选和方法学考察。其中色谱条件的筛选中分别对不同流动相、不同洗脱梯度、不同检测波长、不同检测时间、不同色谱柱、不同流动相pH值、不同流速、不同柱温等因素进行考察。通过对45批次的铁皮石斛样品测定,以天冬氨酸为参照峰,对其他色谱峰的相对保留时间和相对峰面积进行计算,作为技术参照评价指纹图谱,确定了20个共有峰作为铁皮石斛药材氨基酸部位指纹图谱的特征峰,为鉴别铁皮石斛药材的质量提供依据。