自身免疫性疾病是一大类由于自身免疫系统的免疫耐受或者免疫监视功能异常,引起针对自身抗原的破坏性的免疫反应所导致的疾病。自身免疫性疾病发病部位广泛,常见的有结缔组织自身免疫性疾病(类风湿性关节炎),消化系统自身免疫性疾病(肝炎),泌尿系统自身免疫性疾病(肾炎)等等。　　 发生在神经系统的自身免疫性疾病,称为神经免疫性疾病。神经免疫性疾病的研究较少,主要集中在以多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS)为代表的中枢神经系统脱髓鞘性疾病(病灶以累及大脑、小脑、脑干为主。)；格林-巴利综合症为代表的周围神经脱髓鞘疾病；重症肌无力为代表的胸腺自身免疫性疾病。神经免疫性疾病严重危害人体健康,至今仍没有特异性的生物标记物对其诊断、治疗。　　 蛋白质组学(proteomics)是指一个细胞或一个组织/体液基因组所表达的全部蛋白质,是在整体水平上研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律。蛋白质组学技术最大的优势在于:能同时对成千上万种蛋白质进行分析、检测,克服了传统研究手段的局限,从系统生物学角度研究蛋白质间的变化及作用,更有利于发现新的对疾病发生有潜在意义的蛋白质靶点。　　 血清(serum):是指血液凝固后,在血浆中,除去纤维蛋白原所分离出的淡黄色透明液体。血清作为一种复杂的体液成份,含有小分子,盐,蛋白质等多种物质,而血清蛋白组分的改变能够精确地反映机体的病理变化过程,因此开展血清蛋白组学研究,将有利于阐明疾病发生机理,可为疾病诊断提供理论和实验依据。　　 本研究成功建立了神经免疫性疾病血清蛋白质组学技术体系并结合Westernblot验证实验,比较了神经免疫性疾病(如,多发性硬化)组血清与对照组(其他神经系统疾病)血清的蛋白质组的变化,寻找与该疾病的发生机制相关的具有潜在意义的生物标记物,以期从蛋白质及系统生物学水平探讨其发病的机理,为临床诊断、预后及治疗提供有力的理论依据。　　 第一部分血清蛋白质组学技术体系的建立　　 目的:对人血清蛋白质样品制备方法进行比较优化,以建立完善的血清蛋白质组学技术体系。　　 方法:收集血清,分别采用五种不同的沉淀法提取总蛋白。之后,进行双向凝胶电泳分离蛋白质组,染色以及ImageMaster2D图像软件统计、比较分析。　　 结果:成功获得不同的血清蛋白质组表达图谱,并对丙酮沉淀法,三氯醋酸沉淀法,三氯醋酸/丙酮沉淀法,蛋白纯化试剂盒处理血清所得到的2DE图谱进行统计分析,得到平均蛋白质点数分别为(1802±12),(1648±10),(1727±13),(1670±14)个；去除白蛋白及免疫球蛋白血清所得到的图谱与丙酮沉淀血清所得到的图谱进行统计,得到平均蛋白质点数分别为(1212±16),(1258±12)个。　　 结论:不同血清沉淀方法对血清双向电泳各有优劣；血清去除白蛋白及免疫球蛋白之后,可以提高低丰度蛋白的检出,但同时会导致部分蛋白点的丢失。　　 第二部分神经免疫性疾病的血清蛋白质组学应用研究　　 目的:在本人建立的血清蛋白质组学技术体系的基础上,对神经免疫性疾病患者血清进行比较蛋白质组学研究,同时应用定量蛋白质组学技术,探索与发病机制相关的潜在生物标记物以及生物标记物与该疾病间的关系,为其发病机理的探索、临床诊断和治疗提供依据。　　 方法:收集MS疾病组与对照组血清,冷丙酮沉淀提取蛋白,分别用Cy3和Cy5荧光染料按最小标记法对MS样本及对照组进行标记。另再取等量混合蛋白用Cy2标记作为内标。混合两组样品后分别在2块双向荧光差异凝胶电泳(2-Dimensional fluorescence Difference In-Gel Electrophoresis,2D-DIGE)胶上进行电泳,通过Typhoon9400多功能荧光扫描仪扫描及DeCyder2D差异分析软件进行定量蛋白质组分析,筛选出表达有显著差异的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser DesorptionIonization Time-Of-Flight Mass Spectroscopy,MALDI/TOF MS)得到肽质量指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting,PMF),搜索NCBInr数据库对其进行鉴定,采用Western blot对鉴定结果进行验证。　　 结果:分别获得MS患者及对照组血清蛋白质组双向荧光差异凝胶电泳表达图谱,21个蛋白质点在两组凝胶图谱上存在明显差异,4个点在MS组显著上调,17个点下调。以维生素D结合蛋白(Vitamin D binding protein,DBP)为例,进行了Western blot半定量验证,其结果与2D-DIGE一致。　　 结论:鉴定出的表达差异显著的蛋白质,可作为神经免疫性疾病的潜在的生物标志物,为发病机理、疾病诊断及药物靶点间的关系探索,提供了理论和实验依据。