尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)是世界以及我国南方区域养殖的重要淡水鱼类之一。近年来随着我国水产养殖规模的扩大,罗非鱼病毒性和细菌性疾病多发,造成了严重的经济损失,严重影响该养殖业的发展,因此免疫防治成为解决这些病害问题的重要突破口。CD22属是唾液酸结合免疫球蛋白样凝集(Sigles)家族成员,为I型跨蛋白。该基因表达在成熟的B细胞膜上。CD22的细胞内域包括免疫受体酪氨酸活化基序(Immunoreceptor tyrosine-based activation motif,ITAM)和免疫受体酪氨酸抑制基序(Immunoreceptor tyrosine-based inhibition motifs,ITIM)。CD22是一个黏附类的信号分子,与细胞间相互作用有关,在B细胞的转导过程中起重要作用。本研究克隆的CD22基因开放阅读框序列,对比其表达特征及功能进行了分析。研究结果如下:1.本论文探索尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)CD22在免疫应答中的作用。根据NCBI上公布的罗非鱼CD22基因(记为On-CD22)(Gen Bank登录号:LOC102077587;On-CD22)进行开放阅读框序列的克隆On-CD22基因编码区为1071bp,编码356个氨基酸,理论分子质量为39.35ku,等电点为6.46。On-CD22含有两个IG结构域和一个IGC2,属于IG结构域蛋白质超级家族成员。多序列比对发现On-CD22与其它物种的CD22氨基酸序列同源性介于31.07%～96.53%之间,且与奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)同源性最高。系统进化分析发现On-CD22与奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)的CD22亲缘关系最近。2.实时荧光定量PCR分析显示,On-CD22在健康罗非鱼各组织中均有分布,在头肾和外周血中表达量最高,其次为脑、脾脏、肠、肝脏、胸腺、肌肉和鳃,在皮肤中的表达量最低,经无乳链球菌攻毒后,On-CD22的表达量在头肾、外周血、脑、脾脏、肠、肝脏、胸腺、肌肉、鳃和皮肤等十个组织中均显著上调。结果暗示On-CD22可能参与了机体的免疫应答。3.为研究CD22对胞内信号通路传递的影响,构建了该基因的真核过表达载体pc DNA3.1-CD22,双酶切检测和测序分析表明,插入的片段正确,将pc DNA3.1-CD22导入到HEK293T细胞表达,Western blot检测其大小与预期的相符合。随后将pc DNA3.1-CD22与p RL-TK质粒共转染HEK293T细胞,并对收集的样品进行双荧光素酶报告检测,发现CD22过表达能显著增强NF-κB的转录活性。IFN1和IFN3和STAT1转染FHM细胞,CD22抑制IFN1和IFN3,激活STAT1。以上结果为后续On-CD22功能的研究,进一步探索免疫球蛋白样凝集素家族在硬骨鱼先天免疫中的重要角色奠定基础。