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大樱桃属于蔷薇科樱属落叶乔木,于20世纪90年代初引入中国,是一种重要的经济水果。随着大樱桃种植面积不断扩大,一些危害大樱桃的病害问题逐渐显现并呈加重趋势。大樱桃黑斑果腐病是近年在辽宁省大连市发生的一种大樱桃新病害,病害呈连年加重趋势,在果实成熟季节的6、7月份发病率高达75%,严重影响大樱桃的产量和品质。本文针对大樱桃黑斑果腐病的致病菌进行了较为系统的研究,从病原菌的鉴定、病菌生物学特性、侵染循环特性、致病机理以及室内杀菌剂抑菌效果等方面明确了病原菌的基本特性,从而为病害的防治提供一定的理论基础。研究结果如下:1.大樱桃黑斑果腐病病原菌鉴定对采自辽宁省大连市农科院樱桃园基地的樱桃病样进行病原菌分离纯化,获得纯培养病菌菌株,并对病原菌进行柯赫氏法则证病测定。通过形态学鉴定,将其鉴定为链格孢(Alternaria alternata),在真菌分类上归属于无性孢子类丝孢纲,丝孢目,暗色菌科,链格孢属(Alternaria Nees)(张天宇,2003)。该病原菌株的rDNA-ITS和EF-1α基因序列分别与GenBank中收录序列进行同源性比较,与链格孢A. alternata (GenBank登录号JF835834.1和DQ677927.1)的相似性均达到99%。2.大樱桃黑斑果腐病菌的生物学特性测定试验结果表明:病菌在光照条件下生长情况良好,最适生长温度为30℃,生长最适pH值为6.0。燕麦培养基对菌落生长最有利,胡萝卜培养基最利于产孢。适宜该菌生长的碳源为果糖和蔗糖,氮源为硝酸钾。该菌孢子萌发最适温度为30℃,最适pH值为7.0,最佳碳源为木糖,最佳氮源为磷酸二氢铵。病原菌菌丝致死温度为56℃、10min。研究明确了大樱桃黑斑果腐病菌适生条件较为宽泛、分生孢子萌发能力较强,与田间发病情况较为吻合。3.大樱桃黑斑果腐病菌的致病机理研究测定结果表明,大樱桃黑斑果腐病菌具有较强的的致病活性。毒素能够对寄主的果实、叶片、幼苗以及种子产生不同程度的致病作用,导致果实出现与病害发生时相似的病斑和软腐症状,叶片出现病斑并褪色,幼苗出现萎蔫,对种子的萌发具有较强的抑制作用。最佳的产毒培养液为PS培养液,最佳的产毒pH为8,毒素活性随着培养时间的增加而增强,在25℃时产毒能力最强,持续振荡条件利于产毒。毒素对梨、杏、李致病性较强,而对油桃、山楂致病性较弱。病原菌在活体内、外均能产生PG、PMG、Cx和β-葡萄糖苷酶,4种酶在活体内的活性远高于活体外时的活性。Cx和p-葡萄糖苷酶在活体内的酶活性要高于PG、PMG,说明在病原菌侵染时主要是Cx和p-葡萄糖苷酶起作用。在活体外时PG、PMG酶活性要高于Cx和p-葡萄糖苷酶,说明活体外培养时PG和PMG先起作用。活体外培养时,四种酶酶活性均在30℃时到达高峰,低温或高温培养能够降低酶的活性,Cx和p-葡萄糖苷酶酶活性在9d时到达高峰,而PG、PMG在12d时酶的活性最高。4.大樱桃黑斑果腐病侵染循环研究通过2010-2012年间对辽宁大连樱桃园的田间调查发现,大樱桃黑斑果腐病呈连年加重趋势。在每年6、7月份即大樱桃果实成熟时期为害严重,在温度较高、降雨量较大的夏季发病率高达75%,严重时发病率高达95%。调查发现,晚熟品种较早熟品种发病严重。大樱桃黑斑果腐病菌具有较强的存活能力,在田间地表、田间地下10cm、室内20℃、4℃冷藏、-20℃冷冻5种处理条件下均可越冬存活。在12个月后,田间和室内的处理病菌存活率仍达70%以上,即使经过18个月,室内和田间处理病菌存活率仍达62.5%以上。接种试验表明,病菌能以自然孔口或伤口侵入寄主,伤口侵入时发病较重。自然条件下,病原菌能够直接侵入寄主,在果柄的萼凹处发病较重。病原菌通过菌丝体侵入寄主,病害的潜育期一般为3d,7d后病害症状明显。寄主范围测定表明,链格孢对草莓、梨和苹果的果实致病性最强,其次为桃、油桃、杏、李,但不侵染或较难侵染山楂。对梨、杏、李叶片致病性较强,产生典型黑斑,而对山楂、草莓叶片致病性不强。5.大樱桃黑斑果腐病菌室内抑制效果测定室内抑菌效果测定结果表明,供试8种杀菌剂对病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用存在差异。氟硅唑、咪鲜胺对菌丝生长的抑制作用最为明显,对菌丝生长的抑制率达到100%;代森锰锌、咪鲜胺、腈菌唑对孢子萌发的抑制率均达85%以上。咪鲜胺、腈菌唑、苯醚甲环唑对菌丝生长和孢子萌发均有较好的抑制作用。