论文部分内容阅读
目的: 1.采用中波紫外线对小鼠脱毛部位皮肤进行照射,建立小鼠皮肤紫外线损伤的动物模型,并探讨造成皮肤损伤的特点及机制。 2.运用小鼠皮肤紫外线损伤模型,研究辅酶Q10霜剂抗小鼠皮肤紫外线损伤的作用。 3.运用分子生物学等技术,探讨辅酶Q10霜剂保护小鼠皮肤紫外线损伤的作用机制。 方法: 32只3月龄雌性昆明小鼠,适应环境2周后,根据体重数据把小鼠随机分为4组,平均每组8只,分别为正常对照(CON)组、模型(MOL)组、辅酶Q10霜剂(COQ)组、阳性药物甲氧基肉桂酸辛酯霜剂(OMC)组。各组小鼠背部皮肤采用物理方法脱毛后,第一组不进行任何实验处理,第二组小鼠每天在脱毛部位皮肤涂抹空白霜剂,再进行紫外线照射,照射剂量为最小红斑量;第三组小鼠每天在脱毛部位皮肤涂抹辅酶Q10霜剂后进行紫外线照射,照射剂量为最小红斑量;第四组小鼠每天在脱毛部位皮肤涂抹甲氧基肉桂酸辛酯霜剂后进行紫外线照射,照射剂量为最小红斑量,实验期间小鼠均自由饮水和进食,实验周期共8周,每周称重1次。实验结束后,小鼠眼球取血处死,剪下小鼠暴露部位皮肤组织进行下述指标检测:(1)运用血细胞分析仪测量小鼠血细胞数量;(2)运用试剂盒检测小鼠血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量与活力;(3)运用试剂盒检测小鼠皮肤组织总超氧化物歧化酶、丙二醛和谷胱甘肽过氧化物酶的含量与活力;(4)对小鼠皮肤组织进行石蜡包埋切片,行HE、VG染色,观察小鼠皮肤组织病理损伤情况;(5)提取小鼠皮肤组织RNA,进行逆转录,用荧光定量PCR技术检测小鼠皮肤组织基质金属蛋白酶MMP-1的表达水平;(6)提取小鼠皮肤组织蛋白,利用Western Blot技术检测小鼠皮肤组织DNA甲基转移酶DNMT1的表达水平。 结果: 1.各组小鼠体重变化:与CON组比较,MOL组小鼠体重在第五周开始出现下降(p<0.05);与MOL组比较,COQ组小鼠体重在第五周出现下降(p<0.05);与MOL组比较,OMC组小鼠体重在第5周第7周也出现下降(p<0.05)。其中OMC组小鼠增重量最高,为23.6%,MOL组小鼠增重量最低,为18.6%,CON与COQ组小鼠增重量分别为19.7%与20.3%。 2.各组小鼠血细胞变化:与CON组小鼠比较,MOL小鼠白细胞数量明显增多(p<0.05),红细胞数量与血红蛋白含量稍微增多,血小板数量则相差不大;与MOL组比较,COQ组小鼠白细胞数量减少(p<0.05),红细胞与血小板数量相差不太,血红蛋白含量增多;与MOL组比较,OMC组小鼠白细胞数量减少(p<0.05),红细胞数量增多,血小板数量减少,血红蛋白含量则相差不大。 3.各组小鼠血清生化指标变化:与CON组比较,MOL组小鼠丙二醛含量明显增高(p<0.05),总超氧化物歧化酶与谷胱甘肽过氧化物酶活力降低,其中总超氧化物歧化酶具有统计学差异,谷胱甘肽过氧化物酶无统计学差异;与MOL组比较,COQ组小鼠丙二醛含量降低,无统计学差异,总超氧化物歧化酶活力升高(p<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶活力升高,无统计学差异;与MOL组比较, OMC组小鼠丙二醛含量、总超氧化物歧化酶活力、谷胱甘肽过氧化物酶活力均稍微升高,但都不具有统计学差异; 4.各组小鼠皮肤外观学观察:CON组小鼠部皮肤红润光滑,表皮细嫩;MOL组小鼠皮肤表皮粗糙且皮屑脱落,皮纹加深,有皮肤皱纹出现;COQ组小鼠皮肤表皮平滑无皮屑脱落,也无皮纹加深与皱纹出现,皮肤颜色较深沉;OMC组皮肤表皮比较平滑没有皮屑脱落,也无出现皮纹加深与皱纹出现,皮肤颜色红润。 5.各组小鼠皮肤组织生化指标变化:与CON组比较,MOL组小鼠丙二醛含量明显增高(p<0.05),总超氧化物歧化酶(p<0.05)与谷胱甘肽过氧化物酶活力降低;与MOL组比较,COQ组小鼠丙二醛含量降低,总超氧化物歧化酶活力升高(p<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶活力升高;与MOL组比较,OMC组小鼠丙二醛含量降低,总超氧化物歧化酶活力升高(p<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶活力升高(p<0.05)。 6.各组小鼠皮肤组织病理学观察:CON组小鼠的皮肤表皮厚度较薄,角质层无脱落,在真皮层中乳头层薄,网织层无交织,细胞与皮肤胶原纤维排列整齐,大小均匀;MOL组小鼠皮肤表皮厚度较厚,角质层脱落,在真皮层中乳头层比较厚,网织层交织排列较混乱,胶原纤维粗大;COQ组小鼠皮肤厚度较薄,在表皮中角质层比较完整无脱落现象,在真皮层中网织层无交织,细胞核与胶原纤维排列整齐;OMC组小鼠皮肤厚度与COQ组小鼠相差不大,角质层完整无脱落,在真皮层中网织层无交织,且胶原纤维与细胞核排列整齐。 7.各组小鼠皮肤组织MMP-1表达水平变化:与CON组比较,MOL组小鼠皮肤组织的基质金属蛋白酶表达量增高(p<0.05);与MOL组比较,COQ组小鼠皮肤组织基质金属蛋白酶表达量降低(p<0.05);与MOL组小鼠比较,OMC组小鼠皮肤组织基质金属蛋白酶表达量降低,无统计学差异。 8.各组小鼠皮肤组织DNA甲基转移酶DNMT1表达水平变化:与CON组比较,MOL组小鼠皮肤组织的DNMT1表达量降低(p<0.05);与MOL组比较, COQ组小鼠皮肤组织DNMT1表达量升高(p<0.05);与MOL组比较,OMC组小鼠皮肤组织DNMT1表达量升高(p<0.05)。 结论: 1.采用中波紫外线对小鼠脱毛部位皮肤进行照射,可以建立小鼠皮肤紫外线损伤的动物模型。 2.与模型组比较,辅酶Q10霜剂能起到抗小鼠皮肤组织紫外线损伤的作用,其效果与阳性药甲氧基肉桂酸辛酯霜剂相差不大。 3.辅酶Q10霜剂发挥抗小鼠皮肤紫外线损伤的作用,其作用与其清除小鼠机体丙二醛自由基,提高抗超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性,同时减少小鼠皮肤组织MMP-1基因的表达量与增高DNMT1蛋白的水平含量有关。