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目的:研究同样在维持心脏正常结构和功能过程中发挥着重要作用的转录因子心肌素Myocardin对L型钙离子通道Cav1.2的转录调控作用及分子机制。 方法: 1.研究Myocardin对心肌细胞膜钙电流的影响: 在原代心肌细胞中，感染LV-Myocardin慢病毒质粒过表达Myocardin，感染LV-sh-Myocardin慢病毒质粒干扰心肌细胞内源性Myocardin，感染空白慢病毒质粒PTK642作对照，电生理膜片钳技术检测钙电流的变化。 2.证实Myocardin可以激活LTCC基因的表达: 在心肌细胞系H9C2细胞中，感染LV-Myocardin慢病毒质粒，过表达Myocardin利用RT-PCR、real-timePCR定量检测LTCC基因mRNA水平;用Western blotting检测LTCC基因蛋白表达水平;细胞免疫荧光技术检测LTCC基因蛋白分布。 3.证实干扰Myocardin可以抑制Cav1.2基因的表达: 同2，在心肌细胞系H9C2细胞中，感染LV-sh-Myocardin慢病毒质粒，干扰心肌细胞内源性Myocardin，检测LTCC基因mRNA水平、蛋白表达和分布。 4.证明Myocardin可以激活Cav1.2基因的转录: 在293-T细胞中，共同转染Myocardin和Cav1.2-luc荧光素酶报告基因质粒，利用luciferase报告基因活性技术检测Cav1.2启动子活性。 5.研究Myocardin激活Cav1.2基因的转录是否依赖其启动子上的CarGbox: 利用WT-Cav1.2-luc，mut-CarG box-Cav1.2-luc（突变CarG box）-promoter-Luc质粒，检测Myocardin对上述Cav1.2-Luc启动子活性的影响。 应用ChIP染色质免疫共沉淀技术，进一步证明Myocardin通过与靶基因Cav1.2启动子区CarGbox序列特异性结合从而启动基因转录。 结果: 1.Myocardin增加心肌细胞膜钙电流。 与对照组相比:过表达Myocardin后心肌细胞膜钙电流显著增强，干扰内源性Myocardin后心肌细胞膜钙电流显著降低。 2.Myocardin激活LTCC Cav1.2基因的转录和表达: 过表达Myocardin激活Cav1.2启动子活性、mRNA和蛋白表达水平显著增强、细胞免疫荧光技术检测LTCC基因蛋白表达量增加且与对照组相比更多的分布在细胞核和胞浆中;干扰内源性Myocardin之后结果与之相反。 3.Myocardin激活LTCC Cav1.2基因的转录依赖其启动子上的CarGbox: LTCC基因启动子区CarGbox基因突变后，报告基因活性显著下降;Chip检测结果显示:Myocardin与LTCC Cav1.2启动子区CarGbox特异性结合。 结论:Myocardin通过与LTCC Cav1.2基因启动子区CarGbox结合进而激活其转录和表达，影响钙离子通道蛋白的分布，促进Ca2+内流，增加膜电流。