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前言 腹膜转移是进展期胃癌根治术后最常见的复发形式，是导致死亡的重要原因。研究表明，多种粘附分子介导的癌细胞与细胞外基质（ECM）相互作用是诱发侵袭和转移的前提条件，其中CD44和Integrinβ1是介导胃癌侵袭和转移的主要和独立的粘附分子。CD44是一类细胞表面糖蛋白，发挥多种生理及病理作用，它可以特异性识别其配体透明质酸（HA），影响肿瘤侵袭和转移。HA是基本结构单一的糖胺多糖，是ECM的主要结构分子，其表达与肿瘤细胞行为间有一定的联系。Integrinβ1是由α、β亚单位通过二硫键形成的异质性二聚体跨膜糖蛋白，可以与ECM成分及细胞骨架结合而形成配体-Integrinβ1-细胞骨架跨膜信息系统，介导肿瘤细胞的粘附和转移，主要机制是识别ECM蛋白上的RGD重复序列。RGD是由精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸残基构成的三肽，是纤连蛋白（FN）等ECM蛋白的功能结构。本研究从CD44和Integrinβ1入手，重点探讨不同水平联合阻断胃癌高转移细胞系SGC7901粘附、侵袭ECM的效果，旨在探寻阻断治疗的可行途径。 实验材料 以人胃癌细胞系SGC-7901为研究对象。主要仪器包括：超净工作台，CO2培养箱，Boyden小室，低温超速离心机，PCR仪，电泳仪，凝胶自动成像仪，FCM等。主要试剂包括：DMEM培养基，Matrigel，HA，Hase，RGD肽，抗CD44及Integrinβ1单抗，FITC-山羊抗小鼠IgG，硫代磷酸修饰的寡核苷酸（ODN）序列，Lipofectin Reagent，TRIZOL Reagent，Reverse Transcription System A3500，达曲线明显左移，提示IntegrinPI mRNA及蛋白表达有不同程度的降低；5．粘附和侵袭实验证明，lute吵npl asODN转染SGC7901后显著降低其粘附力及侵袭力汀＜0．00入抑制率分别为54 ％和76％，效果明显优于随机序列u＜0．OO门。 讨 论 癌的侵袭和转移是一个多因素、多步骤、多阶段的复杂过程。参与调节的因子中CD44和IntegrinPI是两个独立作用的因子。本研究在多水平联合阻断胃癌的粘附和侵袭，以探寻其对阻断胃癌粘附和侵袭ECM的疗效。结果发现，胃癌高转移细胞系SGC7901不仅表达CD44和lute吵npl蛋白，而且二者都是功能性蛋白。以不同顺序联合应用H者以 Hase＋HA组效果较好，联合三者阻断的效果优于任何单一因素及联合应用HA和Hase，究其原因系 CD44和 Integrinpl是两个独立作用的粘附因子，同时阻断可有加和作用，提示联合应用粘附抑制剂是胃癌抗粘附治疗的一个新的着眼点。用硫代磷酸修饰的 Integrinp asODN以脂质体为载体转染SGC7901，可见其顺利进人细胞，均匀分布于胞浆及胞核，SGC7901的 Integrinpl mRNA和蛋白表达均下降，对 ECM的粘附和侵袭也下降，效果均优于随机序列。上述结果提示lute一nPIasODN可能在胞浆和胞核中同时起作用，通过多种机制引起SGC7901 Integrinpl mRNA及蛋白表达下降，在此基础上，降低其粘附力和侵袭力，证实了以脂质体为载体转染硫代磷酸修饰的Integrinpl asODN具有良好的生物学活性，为进一步研究Integrin盯 asODN的抗转移作用提供了一定的实验依据。 J 结 本研究从CD44和lute郎npl人手，通过不同水平联合阻断胃 ·3·癌高转移细胞系SGC7901粘附＼侵袭ECM，探讨阻断治疗的可行途径。间接免疫荧光法测定 SGC7901细胞表面 CM与lute一npl蛋白表达；单独及联合HA、Hase和RGD分别处理SGC7901后MTh法和BOydyn ／j’室模型分别测定其粘附力和侵袭力同时观察细胞形态；硫代磷酸修饰的ODN转染SGC7901细胞，免疫化学方法观察其在细胞内的分布，RT－PCR及FCM分别测定M匆n印 mRNA和蛋白水平的变化。结果发现人胃癌细胞系SGC7901的确有CM与lute扣npl蛋白的表达；单独使用HA、Hase及RGD肽均降低SGC7901细胞的粘附力和侵袭力；处理组和未处理组细胞形态也有不同；不同顺序应用HA和Hase，以Hase＋HA组效果更好，联合三者对粘附的抑制效果优于任何单独应用一个因素及联合＊A和Hase两者(P＜o．00门，提示联合应用粘附抑制剂是胃癌抗粘附治疗的一个新的着眼点＊asODN转染SGC7901后均匀分布于胞浆及胞核，引起InteghnplmRNA及蛋白表达不同程度降低，粘附力及侵袭力亦降低，效果均优于随机序列，从而证实了以脂质体为载体转染硫代磷酸修饰的lute扣nPI asODN具有良好的生物学活性，为进一步研究IntegrinPI asODN的抗转移作用提供了一定的实验依据。 结 论 1．人胃癌细胞系SGC7901 表面表达功能性CD44和hte中npl蛋白。 2．单独和联合使用HA、Hase和RGD均不同程度抑制SGC7901细胞对ECM的粘附和侵袭，以联合三者阻断效果为优。 3．lute吵npl asODN转染SGC7901后可降低其mRNA及蛋白表达水平，从而降低其对ECM的粘附和侵袭，效果优于随机序列。 4．联合HA刀ase和RGD或应用lute加npl asODN都是阻断 ·4·人胃癌细胞系SGC7901粘附、?