母乳源乳酸菌的筛选、鉴定及其益生特性研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xaolan811
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乳酸菌作为人体有益菌,因其具有调节肠道菌群、提高机体免疫力、促进营养物质吸收等多种益生功能,被广泛应用于乳制品等食品中。而作为婴儿健康成长的营养物质来源,母乳也是益生菌的重要筛选菌库。因此,本研究旨在从健康母乳中筛选益生菌的候选菌株,并对其益生功能进行初步测定,以期能在产业化后应用于婴儿食品,使无法实现母乳喂养的婴儿得到更健康的保证。本实验从10份母乳样品中分离、筛选乳酸菌,共筛选出22株乳酸菌,通过耐酸耐胆盐复筛得到一株植物乳杆菌R9并对其进行深入研究。对植物乳杆菌R9进行了耐受能力(耐酸、耐胆盐及抗生素敏感性)和益生能力(抑制致病菌、粘附肠上皮细胞HT-29)的研究。结果表明,植物乳杆菌R9在p H2.5的环境下培养24h和胆盐浓度4.5%的条件下培养6h,活菌数仍在106cfu/m L以上,具有很强的耐受能力;其发酵液和上清液对大肠埃希氏菌、单增李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、宋氏志贺氏菌、蜡状芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、阪崎肠杆菌、肠炎沙门氏菌8种常见致病菌的抑菌直径均在20mm以上;对氨苄西林、红霉素、阿米卡星、克林霉素、头孢曲松、环丙沙星、阿奇霉素等7种常见抗生素表现敏感,对氯霉素轻度敏感,但耐受青霉素G、四环素。粘附性实验结果显示,植物乳杆菌R9对细胞HT-29的粘附能力受作用时间、菌液浓度、Ca2+浓度的影响,当作用时间为1.5h、菌液浓度在1.0×1010cfu/m L、Ca2+离子浓度达到11mmol/L时,菌株粘附数达到最大分别为(6.52±0.32)cfu/cell、(8.14±0.26)cfu/cell、(8.14±0.26)cfu/cells。在致病菌的粘附抑制试验中,植物乳杆菌R9表现对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最佳粘附抑制方式是排斥抑制,对沙门氏菌的最佳粘附抑制方式是竞争抑制全基因测序分析结果表明,植物乳杆菌R9的基因组大小为3,530,009 bp,G+C含量为44.67%,符合植物乳杆菌的特征;使用GO、KEGG、COG数据库进行注释,结果显示,植物乳杆菌R9含有大量参与催化、碳水化合物运输和代谢、氨基酸转运与代谢的基因,说明其具有很强的催化、碳水化合物利用等能力。通过CARD数据库比对,共比对出15种抗性基因,8种耐受抗生素,其中利福平素的基因数最多且出现两次,Identity值达到70%。综上所述,植物乳杆菌R9具有较好的耐酸、耐胆盐以及粘附特性,对8种常见致病具有明显抑菌效果,对7种抗生素表现敏感,且从基因水平为益生菌特性研究奠定基础,可作为益生菌的候选菌株。
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