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第一部分阿拉伯半乳聚糖适配子的筛选及诊断价值评估背景与目的:结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的慢性传染性疾病。MTB特有的细胞壁结构是由分枝菌酸、肽聚糖和阿拉伯半乳聚糖(arabinogalactan,AG)通过共价连接组成,对菌的生存和复制极其重要。AG连接细胞壁外层的分枝菌酸和内层的肽聚糖对维持细胞壁的完整性非常重要,且为分枝杆菌所特有。糖类抗体制备难度较大,目前尚无靶向AG的抗体,而通过指数富集配体系统进化(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选获得的适配子能与蛋白、病毒、细胞等不同靶标高亲和力结合。因此,本研究目的是通过SELEX技术筛选分枝杆菌AG的适配子,并初步应用于MTB的检测。方法体外构建合成一个含78个碱基的随机ssDNA文库,通过SELEX技术从随机ssDNA文库中筛选获得分枝杆菌AG的适配子库,将适配子库进行克隆、测序。通过DNAMAN软件分析适配子的结构,MEGA软件分析适配子的系统进化树,酶联寡核苷酸吸附试验(enzyme-linked oligonucleotide sorbent assay,ELOSA)测定适配子与AG的亲和力,筛选出优势适配子。FITC荧光标记优势适配子,运用荧光技术评估适配子对48株培养菌株(包括分枝杆菌和非分枝杆菌)的检测价值。结果经过7轮筛选,共获得了33个AG的适配子。通过分析适配子的动态演化及其与AG的亲和力获得了一个优势适配子群和5个高亲和力适配子。选取优势适配子MAA5进行FITC标记,通过免疫荧光检测48株培养菌株,结果显示34株MTB全部均与MAA5结合,14株非分枝杆菌与MAA5均无结合。结论运用SELEX技术成功筛选获得了分枝杆菌AG的适配子,并具有一定的MTB的鉴别诊断价值。第二部分结核分枝杆菌新抗原肽的筛选及诊断价值评估背景与目的:目前结核病的疫情形势依然十分严峻,社会中绝大多数群体是结核菌潜在的感染对象,耐药人数也在持续增加,结核病的防治仍然是一个艰巨任务。因此,新型诊断技术、药物及疫苗的研发对控制目前和将来的结核病疫情非常重要。结核分枝杆菌新抗原肽的筛选为结核病的新型诊断和疫苗研发提供基础,因此本研究目的是进行结核分枝杆菌新抗原肽的筛选,并通过临床样本检测评估其诊断效能,找出检测效果好诊断价值高的优势抗原肽。方法将手术切除的肺结核患者肉芽肿组织裂解后,通过免疫共沉淀技术利用人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)抗体免疫共沉淀HLA-肽复合物,通过液质联用技术鉴定HLA结合肽段的序列,并通过序列比对,发现来源于结核分枝杆菌的肽段序列,将鉴定的抗原肽合成。收集肺结核患者和肺部其他疾病患者以及健康体检者的全血样本,将抗原肽进行分组,利用TB-IGRA试剂盒评估抗原肽的诊断效能,同时与试剂盒的诊断效能进行比较。结果通过液质联用技术共鉴定到57条肽段来源于结核分枝杆菌,将抗原肽进行合成并分组,利用TB-IGRA试剂盒和抗原肽检测103例全血样本并对其检测效果进行初步评估。结果显示抗原肽对103例样本总体检测的灵敏度和特异度分别为34.37%、74.35%,试剂盒对103例样本的检测灵敏度和特异度分别为93.75%、64.10%。随后重新对抗原肽进行分组,以HLA-Ⅱ递呈的25-57号抗原肽为主,共检测130例样本。结果显示抗原肽对130例样本总体检测的灵敏度、特异度分别为51.43%、93.33%,试剂盒对130例样本检测的灵敏度、特异度分别为85.71%、91.67%。此外,还筛选到一组优势抗原肽组,检测的灵敏度和特异度分别为51.16%、94.92%。结论本次从肺结核患者肉芽肿组织中鉴定到的结核分枝杆菌新抗原肽,对结核病具有一定的诊断价值。其中优势抗原肽组合具有良好的应用价值,可进一步优化用于结核病诊断研究或疫苗研发。